芳香族L-アミノ酸デカルボキシラーゼの構造と機能の解析

芳香族L-氨基酸脱羧酶的结构与功能分析

基本信息

  • 批准号:
    06780516
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.64万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1.芳香族L-アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)変異型酵素の解析一次構造の比較よりすべてのデカルボキシラーゼに保存されている解離性残基9個について、部位特異的変異によりアミノ酸置換を行い、脱炭酸反応におけるこれらの残基の役割について検討した。その結果、Lys317およびCys311については脱炭酸反応に必須ではなく、またTrp363は芳香族残基で代用可能であった。His192,Asp252および補酵素ピリドキサルリン酸を結合しているLys303に関しては、アミノ酸置換により活性が消失しこれらの残基が脱炭酸反応に必須であることが明らかとなった。His269およびAsp271については変異型酵素の安定な発現が認められず、現在発現効率の上昇のための条件を検討中である。2.AADCと基質との反応に関する残基の解析AADCと基質ドーパとの結合のpH依存性から活性部位にpK_a=6-7の解離性残基の存在が示唆された。一次構造の比較からその候補としてHis192およびHis269が予想された。このうちまず、発現量が多く酵素タンパクが十分に得られたHis192をAlaに置換した変異型酵素(H192A)について解析を行った。H192Aは酵素活性を消失しておりHis192が触媒反応に必須であることがわかった。基質アナログであるドーパO-メチルを用いた分光学的解析から、この酵素活性の消失は、反応の初発段階において重要であるアルドイミン交換反応の過程が障害されたためであり、この過程へのHis192の関与が考えられた。3.AADCの立体構造の解析AADCの反応機構の解明のためには立体構造についての情報が不可欠である。そこで、AADCの結晶化についてさまざまな検討を行い、結晶化の条件についてはほぼ確立した。しかしながら現在までのところ解析に耐え得る結晶を得るまでには至っておらず、さらによい結晶を得るため条件を改良中である。
1. Analysis of Aromatic L-Amino Acid Isoenzymes (AADC) by Primary Structural Comparison of 9 Dissociative Residues in the Preserved AADC and Site-Specific Variants in the AADC and AADC. As a result, Lys317 and Cys311 may be substituted for aromatic residues. His192,Asp252 and complement enzymes bind to decarboxylate and Lys303 are involved in acid substitution and activity is lost. His269 and Asp271 are among the conditions under which isoenzymes are stable and present. 2. The pH-dependence of the binding of AADC to the substrate and the existence of dissociative residues at pK_a=6-7 in the active site were also investigated. A comparison of primary structures is made between His192 and His269. This is the first time that the enzyme has been detected. H192A enzyme activity disappeared, His192 enzyme activity disappeared. The analysis of the substrate, the disappearance of enzyme activity, the initial stage of the reaction, the process of the exchange of the reaction, the process of the reaction, and the relationship between the reaction and His192 are important. 3. Analysis of AADC's three-dimensional structure. Analysis of AADC's anti-reflection mechanism. Analysis of AADC's three-dimensional structure. In addition, the crystallization of AADC is discussed in detail, and the crystallization conditions are established. The analysis of the crystal structure is based on the improvement of the crystal structure.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kagamiyama,H.: "Enzyme-substrate interactions modulating protonation and tautomerization states of the aldimines of pyridoxal enzymes" Biochemistry of Vitamin B6 and PQQ(Marino,G.,Sannia,G.,and Bossa,F.eds). 43-47 (1994)
Kagamiyama, H.:“酶-底物相互作用调节吡哆醛酶醛亚胺的质子化和互变异构状态”维生素 B6 和 PQQ 的生物化学(Marino, G.、Sannia, G. 和 Bossa, F.eds)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ patent.updateTime }}

水口 博之其他文献

教育講演:ヒスタミン受容体とアレルギー疾患
教育讲座:组胺受体与过敏性疾病
  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    水口 博之;他;福井裕行;Okada M;福井 裕行
  • 通讯作者:
    福井 裕行
頭部外傷マウスのBlood-brain barrier破綻に対する血管修復因子Angiopoietin-1の発現増加を介した抑制効果
通过增加血管修复因子 Angiopoietin-1 的表达来抑制头部受伤小鼠的血脑屏障破坏
  • DOI:
  • 发表时间:
    2018
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    道永 昌太郎;中谷 隆聖;福留 千裕;井上 杏奈;岩根 綾;田邉 彩美;山本 隼人;水口 博之;小山 豊
  • 通讯作者:
    小山 豊
抗アレルギー天然物医薬、苦参の有効成分、(-)マーキアインの分子薬理機構
抗过敏天然产物药物苦参有效成分(-)markiain的分子药理机制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2016
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    福井 裕行;水口 博之;柏田 良樹;根本 尚夫;北村 嘉章;武田 憲昭
  • 通讯作者:
    武田 憲昭
TRPV4阻害薬による外傷性脳損傷後の血管原性脳浮腫に対する抑制作用
TRPV4抑制剂对脑外伤后血管源性脑水肿的抑制作用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    道永 昌太郎;大西 一也;清水 かほり;水口 博之;菱沼 滋
  • 通讯作者:
    菱沼 滋
Studies on natural products induced by bacterial membrane vesicles
细菌膜囊泡诱导天然产物的研究
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    道永 昌太郎;園田 清美;稲月 直樹;江嵜 愛永;粟根 宙生;清水 かほり;小川 泰弘;菱沼 滋;水口 博之;Aya Yoshimura
  • 通讯作者:
    Aya Yoshimura

水口 博之的其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

{{ truncateString('水口 博之', 18)}}的其他基金

温度感受性リポリーム・インプラントヒーティングシステムによる選択的温熱動注療法
使用温度敏感 Liporeum 植入物加热系统进行选择性动脉高温治疗
  • 批准号:
    04770866
  • 财政年份:
    1992
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

相似海外基金

部位特異的変異導入によるMMLV逆転写酵素の耐熱性と逆転写の正確性の向上
通过定点突变提高MMLV逆转录酶的热稳定性和逆转录的准确性
  • 批准号:
    13J01955
  • 财政年份:
    2013
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
部位特異的変異導入によるサーモライシンの機能改変とペプチド合成への応用
通过定点诱变对嗜热菌蛋白酶进行功能修饰及其在肽合成中的应用
  • 批准号:
    07J07098
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
担子菌類由来のセルロース分解酵素に対する部位特異的変異の導入と触媒機構の解析
担子菌纤维素分解酶定点突变的引入及其催化机制分析
  • 批准号:
    15780206
  • 财政年份:
    2003
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
X線結晶構造解析及び、部位特異的変異法によるキサンチン脱水素酵素の構造・機能の研究
利用X射线晶体结构分析和定点突变研究黄嘌呤脱氢酶的结构和功能
  • 批准号:
    13770063
  • 财政年份:
    2001
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
部位特異的変異法によるNO合成酵素の電子移動機構と酸素分子活性化機構の解明
利用定点诱变阐明NO合酶的电子转移机制和氧分子激活机制
  • 批准号:
    11116201
  • 财政年份:
    1999
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
部位特異的変異導入による脂肪酸α水酸化反応の解析
定点诱变分析脂肪酸α-羟基化反应
  • 批准号:
    11770066
  • 财政年份:
    1999
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
オボアルブミンの高次構造形成機構一部位特異的変異法を用いた解析
利用定点诱变分析卵清蛋白高阶结构形成机制
  • 批准号:
    98J09220
  • 财政年份:
    1998
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
部位特異的変異導入法によるフィブロネクチンの複合ドメイン構造の生理的意義の解明
使用定点诱变阐明纤连蛋白复杂结构域结构的生理意义
  • 批准号:
    96J07141
  • 财政年份:
    1998
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
部位特異的変異法によるNO合成酵素の電子移動機構と酸素分子活性化機構の解明
利用定点诱变阐明NO合酶的电子转移机制和氧分子激活机制
  • 批准号:
    10129201
  • 财政年份:
    1998
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
部位特異的変異法によるNO合成酵素の電子移動機構と酸素分子活性化機構の解明
利用定点诱变阐明NO合酶的电子转移机制和氧分子激活机制
  • 批准号:
    09235201
  • 财政年份:
    1997
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
{{ showInfoDetail.title }}

作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了