EIA結合蛋白質p300の生理機能と癌遺伝子c-jumの発現制御機構の解析

EIA结合蛋白p300的生理功能及癌基因c-jum的表达调控机制分析

• 批准号: 06780598
• 负责人: 北林 一生
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780598/
• 关键词: c-jun; p300; retinoic acid; adenovirus E1A; cell differentiation

マウスF9細胞等の胚性腫瘍細胞は、レチノイン酸(RA)処理やアデノウイルスE1Aの発現等により分化が誘導され、c-jun遺伝子は、F9細胞の分化に伴ってその発現が誘導される。本研究の目的は、F9細胞の分化に伴うc-jun遺伝子の発現誘導機構を解析することにより、細胞分化の分子機構を解明することを目的とする。今年度は、以下の解析を行ない、E1A結合蛋白質p300がこの制御に深く関与していることを明らかにした。(1)c-jun遺伝子上流にRAやE1Aによる発現誘導に必要なDNA配列(DRE)を同定した。未分化F9細胞には、このDREに特異的に結合する転写因子DRF1及びDRF2が存在する。このうちDRF2は細胞分化に伴って消失し、この変化には蛋白質リン酸化が関与していることが示唆された。(2)E1Aによるc-junの発現誘導には、E1Aのp300と結合する領域が必要であることが示された。(3)293細胞よりp300を精製し、抗p300抗体を作成した。DRF1及びDRF2は抗p300抗体よりスーパーシフトした。また、p300を293細胞に強制発現させるとDRF1の量が増加した。しかし、精製したp300は単独ではDREに結合しなかった。これらのことから、DRFはp300を含む複合体であることが示された。(4)p300は細胞分化に伴って高度にリン酸化された。また、p300とパヒローマウイルスE2のDNA結合領域の融合蛋白質は、細胞分化にともなってE2結合部位依存的に転写を活性化した。以上の結果から、p300のリン酸化によりDRFが活性化されて、c-junの発現を誘導すると考えられた。

Embryonic tumor cells such as F9 cells were induced to differentiate and develop by RA treatment, c-jun gene treatment, and differentiation of F9 cells. The aim of this study was to elucidate the molecular mechanisms of differentiation associated with c-jun gene expression in F9 cells. This year, the following analysis, E1A binding protein p300 and control of the deep relationship between (1) DNA alignment (DRE) is necessary for the induction of RA and E1A in the upstream of c-jun gene. The presence of DRF1 and DRF2 in undifferentiated F9 cells is associated with DRE specific binding. DRF-2 cell differentiation is associated with the disappearance of protein and the transformation of protein. (2) E1A p300 p300 (3)293 cells p300 purification, anti-p300 antibody production. DRF1 and DRF2 are anti-p300 antibodies. The amount of DRF1 increased after stress in p300 and p293 cells. P300 is a unique combination of DRE. DRF contains a complex. (4)p300 cell differentiation is accompanied by a high degree of acidification. The fusion protein in the DNA-binding domain of p300 and p300 is activated in the cell differentiation domain dependent on the E2 binding site. The above results show that the activation of DRF and the induction of c-jun in p300 are closely related to each other.

项目成果

Li H.O.: "Induction by adcnovirus-5 E1A of the differention phenotybe of F9 teratocarcinoma cells involves a conserved region(CR1)of E1A" Biochimica et Biophysica Acta. (in perss). (1995)

Li H.O.：“通过腺病毒 5 E1A 诱导 F9 畸胎癌细胞的分化表型涉及 E1A 的保守区 (CR1)”Biochimica et Biophysicala Acta。

Kitabayashi I.: "A novcl pathway for rctinoic acid-induced differentiation of F9 cells,that is independent of the rceptor-mediated trans-activation." In vitro Cell.Dev.Biol.30A. 761-768 (1994)

Kitabayashi I.：“一种用于视黄酸诱导的 F9 细胞分化的 novcl 途径，该途径独立于受体介导的反式激活。”

Chen,L.I.: "The rctionblastoma gene product RB stimulates Sp1-mediated transcription by libarating Sp1 from a nagative regulator." Mol.Cell.Biol.14. 4380-4389 (1994)

Chen,L.I.：“rctionblastoma 基因产物 RB 通过将 Sp1 从负调节因子中释放出来，刺激 Sp1 介导的转录。”