白血病関連融合遺伝子産物の作用におけるヒストンアセチル化制御の解析

白血病相关融合基因产物作用中组蛋白乙酰化调控的分析

• 批准号: 12213156
• 负责人: 北林 一生
• 金额: $ 3.65万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213156/
• 关键词: 白血病; ヒストンアセチル化; 細胞分化; 転写因子; 染色体転座; MOZ; AML1

ヒト白血病では高頻度に特異的な染色体転座が見られ、その結果この標的となる遺伝子産物はヒストンアセチル化酵素或いはヒストンアセチル化に関わる因子と複合体を形成することなどから、白血病発症にヒストンアセチル化の制御異常が密接に関連することが明らかになってきた。本年度は、以下のことを明らかにした。(1)急性骨髄性白血病で見られたt(8;22)染色体転座を解析して、2つのヒストンアセチル化酵素をコードするMOZ遺伝子とp300遺伝子が融合し、MOZ-p300融合遺伝子が発現することを見いだした。(2)AML1を強制発現したL-G細胞よりAML1複合体を精製した。LC/MS/MS解析によるシークエンス解析及び特異的抗体を用いたウエスタンブロットによる解析から、この複合体の中にはp300/CBP,mSin3Aの他、MOZが含まれることが示された。AML1変異体及びMOZ変異体を用いた免疫沈降による解析から、MOZの結合にはAML1の転写活性化領域が必要で、MOZにはAML1と結合する領域が2つあることがわかった。(3)AML1の結合配列を持つレポーター解析によりMOZはAML1による転写活性化を強く促進して、AML1のコアクチベーターとして機能することを明らかにし、この活性化に必要なMOZの機能ドメインを同定した。MOZはHAT活性を持つことを初めて証明し、その活性に必要なHATドメインを同定した。しかし、AML1による転写の促進には、このHATドメインは必要がないことが示された。Gal4のDNA結合ドメインとの融合蛋白質を用いた解析から、MOZのC末端領域に新たな転写活性化ドメインを同定した。MOZによる転写促進には、この転写活性化ドメインの他、2つのAML1結合ドメインと酸性ドメインの一部及びN末端領域を必要とした。一方、MOZ-CBPはMOZとは正反対にAML1による転写を著しく抑制した。MOZ-CBPをM1細胞に発現させると分化が見られなくなることから、MOZ-CBPはマクロファージヘの分化を阻害することが示唆された。

ヒ ト leukemia で は high frequency planning に specific な chromosomes seat が see ら れ, そ の results こ の mark と な る heritage 伝 zi chan content は ヒ ス ト ン ア セ チ ル phenoloxidase or い は ヒ ス ト ン ア セ チ ル change に masato わ る factor と complex を form す る こ と な ど か ら, leukemia 発 に ヒ ス ト ン ア セ チ ル change の suppression abnormal が contact に masato even す る こ と が ら Youdaoplaceholder0 になって た. For the current year ら and the following とを とを とを ら た に た た. (1) acute leukaemia of sex of bone marrow で see ら れ た t (8; 22) chromosome planning を parsing し て, 2 つ の ヒ ス ト ン ア セ チ ル phenoloxidase を コ ー ド す る MOZ posthumous son 伝 と p300 heritage 伝 し が fusion, MOZ - traces of p300 fusion 伝 son が 発 now す る こ と を see い だ し た. (2)AML1を forces the release of たL-G cells よ <s:1> AML1 complex を refines <s:1> た. LC/MS/MS analytical に よ る シ ー ク エ ン ス parsing and び specific antibody を い た ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ る parsing か ら, こ の complex in の に は p300 / CBP, mSin3A の him, MOZ が containing ま れ る こ と が shown さ れ た. AML1 - variants and び MOZ - variant を with い た immune sink に よ る parsing か ら, MOZ の combining に は AML1 の planning write activeness が で necessary, MOZ に は AML1 と combining す が る field 2 つ あ る こ と が わ か っ た. (3) the AML1 の combined with column を hold つ レ ポ ー タ ー parsing に よ り MOZ は AML1 に よ る planning write activeness strong を く promote し て, AML1 の コ ア ク チ ベ ー タ ー と し て function す る こ と を Ming ら か に し, こ の activeness に necessary な MOZ の function ド メ イ ン を with fixed し た. MOZ は HAT activity を hold つ こ と を early め て し, そ の active に necessary な HAT ド メ イ ン を with fixed し た. <s:1> がな された, AML1による転 write による転 to promote に に, <s:1> HATドメ ドメ ドメ <s:1> に necessary がな とが とが とが show された. Gal4 の dna-binding ド メ イ ン と の fusion protein を い た parsing か ら, MOZ に の C terminal domain new た な planning write activeness ド メ イ ン を with fixed し た. MOZ に よ る planning write promote に は, こ の planning write activeness ド メ イ ン の he, 2 つ の AML1 combining ド メ イ ン と acid ド メ イ ン の a and を び N terminal field necessary と し た. On one side, the moz-Cbp <s:1> MOZと と opposite にAML1による転 writes を, <s:1> く inhibition た た. MOZ - CBP を M1 cells に 発 now さ せ る と differentiation が see ら れ な く な る こ と か ら, MOZ - CBP は マ ク ロ フ ァ ー ジ ヘ の differentiation を resistance against す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

I.Kitabayashi et al.: "Fusion of MOZ and p300 histone acetyltransferases in acute monocytic leukemia with a t(8;22)(p11;q13) chromosome translocation"Leukemia. 15. 89-94 (2001)

I.Kitabayashi 等人：“急性单核细胞白血病中 MOZ 和 p300 组蛋白乙酰转移酶的融合，伴有 t(8;22)(p11;q13) 染色体易位”白血病。

H.Ichikawa et al.: "Dual transforming activities of the FUS (TLS)-ERG leukemia fusion protein conferred by two N-terminal domains of FUS (TLS)."M.C.B.. 19. 7639-7650 (2000)

H.Ich​​ikawa 等人：“FUS (TLS)-ERG 白血病融合蛋白的双重转化活性由 FUS (TLS) 的两个 N 末端结构域赋予。”M.C.B.. 19. 7639-7650 (2000)

K.Shimizu et al.: "AML1-MTG8 leukemic protein induces the expression of Granulocyte Colony-stimulating factor (G-CSF) receptor through the upregulation of CCAAT/enhancer binding protein epsilon."Blood. 96. 288-296 (2000)

K.Shimizu 等人：“AML1-MTG8 白血病蛋白通过上调 CCAAT/增强子结合蛋白 epsilon 来诱导粒细胞集落刺激因子 (G-CSF) 受体的表达。”血液。

M.Narita et al.: "Consistent detection of CALM-AF10 chimeric transcripts in haematological malignancies with t(10;11)(p13;q14) and identification of novel transcripts."British J.Haematol.. 105. 928-937 (2000)

M.Narita 等人：“使用 t(10;11)(p13;q14) 一致检测血液恶性肿瘤中的 CALM-AF10 嵌合转录本并鉴定新转录本。”British J.Haematol.. 105. 928-937 (

H.Shimada et al.: "Analysis of genes under the downstream control of the t(8;21) fusion protein AML1-MTG8 : overexpression of the TISb(ERF-1,cMG1) gene induces myeloid cell proliferation in response to G-CSF."Blood. 96. 655-663 (2000)

H.Shimada 等人：“对 t(8;21) 融合蛋白 AML1-MTG8 下游控制下的基因进行分析：TISb(ERF-1,cMG1) 基因的过度表达会诱导骨髓细胞增殖以响应 G-