一酸化窒素合成酵素によるシナプス可塑性およびニューロン死調節機構の神経化学的研究

一氧化氮合酶突触可塑性和神经元死亡调节机制的神经化学研究

• 批准号: 06780649
• 负责人: 北村 佳久
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780649/
• 关键词: 神経型一酸化窒素合成酵素(nNOS); 誘導型一酸化窒素合成酵素(iNOS); 抗nNOS抗体; 免疫組織化学; NADPHジアホラーゼ; シナプス可塑性; 神経細胞死; ヒト神経芽細胞腫SH-SY5Y

ラット小脳から精製した分子量16万の一酸化窒素合成酵素(nNOS)をウサギに免疫して、抗体を作製した。得られた抗nNOS抗体は、ウェスタンブロット解析から、分子量13万のiNOSおよび分子量14万のeNOSとは交差反応を示さず、分子量16万のnNOSのみと免疫反応した。この抗体を用いて、免疫組織化学的解析をしたところ、大脳皮質、線条体および海馬の神経細胞が強く免疫染色された。この結果は、NADPHジアホラーゼ染色と一致した。同様に抗カルモジュリン(CaM)抗体を用いて解析したところ大脳皮質、線条体および海馬にもCaMが豊富に存在することが示唆された。このことから、神経細胞にCa^<2+>が流入した時のみ、nNOSは活性化され、NOを産生すること、さらに、神経細胞のシナプス可塑性にも関与することが推定された。初代培養グリア細胞にはnNOSは存在しないが、エンドトキシン(LPS)刺激によって分子量13万の(iNOS)が誘導され、大量のNOが産生されることを見い出した。iNOSは、nNOSと異なり、Ca^<2+>非依存的にCaMと結合し活性化されることが示唆された。このためiNOSはCa^<2+>に影響されることなく、活性化され、大量のNOを産生することが示唆され、細胞死に関与することが推定された。NOを産生するニトロプルシッド(SNP)によってヒト神経芽細胞腫SH-SY5Yは細胞死が引き起こされたが、DBu-cGMP(Gキナーゼ活性化薬)では細胞死は起きないことを見い出した。さらに、SNPによってグリセルアルデヒド-3ーリン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)のADPリボシル化が増強された。以上の結果から、NOによる神経細胞死には、Gキナーゼの活性化が関与せず、GAPDHなどのADPリボシル化が関与することが推定された。

The enzyme nNOS, which has a molecular weight of 160,000, is used for the production of immune and antibody products. Anti-nNOS antibodies were detected and analyzed. Molecular weight: 130,000. Molecular weight: 140,000. Molecular weight: 16,000. Immunohistochemical analysis of these antibodies revealed strong immunostaining of neurons in the cortex, striae and hippocampus. The results were consistent with NADPH staining. In the same way, anti-CaM antibodies are used to analyze the presence of CaM in the cortex, hippocampus and hippocampus. This is the first time that Ca^<2+> has been introduced into the brain, and it is the first time that NO has been activated. In primary culture, nNOS was induced by LPS stimulation and a large amount of NO was produced. iNOS, Ca^<2+>-independent CaM binding and activation The effect of Ca^<2+> on NO production was investigated. NO is produced in the form of SNPs (SNPs), which are produced in the form of SNPs (SNPs). SNPs) SNPs (SNPs) are produced in the form of In addition, SNP and ADP are also used to enhance the activity of the enzyme. The above results show that NO is associated with the activation of neurons, GAPDH is associated with the activation of ADP, and GAPDH is associated with the activation of neurons.

项目成果

Yoshihisa Kitamura: "Suppressive effect of FK-506,a novel immunosuppressant,against MPTP-induced dopamine-depletion in the striatum of young C57BL/6N mice." Journal of Neuroimmunology. 50. 221-224 (1994)

Yoshihisa Kitamura：“新型免疫抑制剂 FK-506 对年轻 C57BL/6N 小鼠纹状体中 MPTP 诱导的多巴胺消耗的抑制作用。”

北村佳久: "ニューロサイエンス講座4:神経伝達物質受容体" 廣川書店, 14 (1994)

北村吉久：《神经科学讲座4：神经递质受体》广川书店，14（1994）

Yoshihisa Kitamura: "Inhibition by pentamidine on N-methyl-D-asparate(NMDA)receptor/channels in the brain." Biological and Pharmaceutical Bulletin. in press. (1995)

Yoshihisa Kitamura：“喷他脒对大脑中 N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 受体/通道的抑制。”

Yoshihisa Kitamura: "Inhibition of constitutive nitric oxide synthase in the brain by pentamidine,a calmodulin antagonist." European Journal of Pharmacology-Mol.Pharmacol.Sec.in press. (1995)

Yoshihisa Kitamura：“喷他脒（一种钙调蛋白拮抗剂）抑制大脑中的组成型一氧化氮合酶。”

Yoshihiko Kitamura: "Nitric Oxide-Roles in Neuronal Communication and Neurotoxicity-" Japan Scientific Societies Press and CRC Press, 11 (1994)

Yoshihiko Kitamura：“一氧化氮在神经元通讯和神经毒性中的作用”，日本科学会出版社和 CRC 出版社，11 (1994)