アルツハイマー病脳に蓄積するPHFタウの胎児型、非胎児型異常リン酸化部位の同定

鉴定阿尔茨海默病大脑中积累的 PHF tau 异常胎儿和非胎儿磷酸化位点

• 批准号: 06780652
• 负责人: 長谷川 成人
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780652/
• 关键词: アルツハイマー病; PHF; タウ; リン酸化; プロリン指向性キナーゼ; 神経細胞死

アルツハイマー病患者脳に蓄積するPHFタウを精製し、これまで未同定であったtau1及びC末端領域の異常リン酸化部位を蛋白化学的に解析した。精製PHFタウをプロテアーゼ消化し、tau1、C末端領域のペプチド得た後、これらをさらに固定化トリプシン等で小断片化して逆相HPLCで展開した。この際に胎児型タウを同様の処理をして比較対照とすることにより、非胎児型の異常リン酸化ペプチドを区別した。PHFタウに特異的なピークに注目しながら、得られたすべてのピークについてアミノ酸配列分析、及びイオンスプレー質量分析を行ない、リン酸化部位を同定した。アミノ酸配列分析はペプチドをアルカリ条件下でエタンチオール処理し、リン酸化セリンをS-エチルシステインに変換して行なうことで、リン酸化セリンをポジティブシグナルとして検出した。その結果、ヒトタウの最も長い分子種の配列番号に従って198、199、202、208、210、214、396、400、404、409、412、413、422番目のセリン、及び212、217、403番目のトレオニンがリン酸化されていることが明らかとなった。これまで同定されていた3箇所を加えて合計19箇所の部位のリン酸化が同定されたことになるが、このうち11箇所の部位は胎児型タウにも検出される部位であった。それ以外の8箇所はPHFタウに特異的なリン酸化部位と考えられた。このような非胎児型のリン酸化部位はセリン/トレオニン-プロリンという配列をもつ、いわゆるプロリン指向性キナーゼの認識部位とそうでない部位があり、非胎児型の異常リン酸化にも複数のキナーゼが関与していることが示唆された。

アルツハイマーpatients 脳に accumulates するPHF タウを Refined し、これまで不同定でAnalyzing the protein chemistry of Tau1 and Abnormal acidification sites in the C-terminal region. After purified PHF digestion, tau1, C-terminal domain digestion , これらをさらにimmobilized トリプシン, etc. でsmall fragmentation してreverse phase HPLC でdevelopmentした. The difference between the non-fetal type abnormal リン acidified ペプチドを and the non-fetal type とすることにより. PHF タウにSpecial なピークにAttention しながら, 得られたすべてのピークについてアThe alignment analysis of ミノ acid and the quality analysis of びイオンスプレーを行ない and the acidification site of リンを同定した. Amin acid alignment analysis, でエタンチオール treatment under conditions of アペプチドをアルカリ, リン acidification セリンをS-エチルシステインに変changeして行なうことで、リン acid化セリンをポジティブシグナルとして検出した.そのRESULTS, ヒトタウのmost long molecular species のalignment number に従って198, 199, 202, 208, 210, 214, 396, 400, 404, 4 No. 09, 412, 413, 422, and No. 212, 217, No. 403 No. のトレオニンがリン acidified されていることが明らかとなった.これまで同定されていた3箇所を加えてTotal 19箇所のpartのリンacidificationが同定されたことになるが, このうち11箇所のpartは煐児Type タウにも検出されるPart であった. The acidified site of PHF is the specific acidification site of PHF.このようなNon-type のリン acidified part はセリン/トレオニン-プロリンという配arrayをもつ、いわゆるプロリンdirectional キナーゼの recognized parts とそうでない parts があり, non-fetal type のabnormal リンThe plural of acidified にものキナーゼが关 and していることがmeans された.