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生細胞内アクチン繊維の新規可視化プローブの作成

创建活细胞中肌动蛋白纤维的新型可视化探针

基本信息

批准号：
18657063
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657063/
关键词：
アクチン可視化 GFP 細胞骨格プローブ

项目摘要

本研究の目的は、全ゲノム配列からアクチン結合蛋白質を検索し、そのアクチン結合ドメイン(ABD:Actin-binding domain)をカテゴリーに分け、それぞれのカテゴリーにあるABD遺伝子と蛍光蛋白質遺伝子の融合遺伝子を作成、細胞内で発現させアクチン繊維のみを観察するのに適し、かつ細胞毒性の無いものを選択し、生きた細胞内のアクチン繊維動態を可視化する新規プロープを開発することである。各カテゴリーのうち、主にアクチン繊維に結合するアクチン結合蛋白質のABDと蛍光蛋白質との融合遺伝子コンストラクトを作製し、細胞内で発現させ、繊維化アクチンのみを観察するのに適したものを見いだすことを主に行なった。30種類のABDについてGFPを融合させたコンストラクトを作成し、細胞に形質導入した。それらのABDの多くは、 CHドメインを1つもしくは2つ持つもの、また、 WDドメインを複数持つものであった。そこで、 CHドメイン、 WDドメインを1つもちくは複数もつような断片とGFPとの融合蛋白質も作成した。これらのうち、アクチンの分布を示すものは、4例だけであった。また、繊維構造をみるため、全反射蛍光顕微鏡で観察したところ、その内の2つは繊維が明瞭に観察された。単純にABDだけをGFPにつないでもアクチン繊維と結合できないものが多く見られた。たぶん、蛋白質の翻訳過程での立体形成過程に問題があるか、出来上がった蛋白質の立体構造が細胞質内で不安定なためであると思われる。ABD以外の冗長配列も加えることもおこなった。結果、いくつかの有効なアクチン繊維可視化プローブが得られた。

The purpose of this study is to prepare the whole system for the purpose of this study. The purpose of this study is to arrange the combination of the protein binding protein (ABD:Actin-binding domain), the fusion protein and the fusion protein. In this study, the aim of this study is to prepare the fusion protein of the whole body, the whole body and the whole body. There is no significant difference in the selection and health of the cell toxicity test. The new regulations can be changed to start the health care cycle. The fusion protein of the fusion protein, the ABD protein, the fusion protein, the fusion protein, the fusion In the case of the 30-year-old ABD system, the GFP system is integrated into the system, and the cells are in the shape of a cell. The number of copies is different from that of ABD, CH, WD, WD, and so on. The fragments, CH fragments, fusion proteins, fusion proteins, and WD proteins were cloned and synthesized. The distribution of the disease showed that there were 4 cases of the disease. The device, the total reflection, the light, the light, the This is the first step in the ABD process. This is the most important thing in the world. This is the most important thing in the world. During the process of protein and protein reversal, there is a problem in the process of three-dimensional formation, and come out and use the protein to create instability in the cell. In addition to ABD, a lengthy column will be added. Results: the results show that there are significant differences between the two groups.