糖質のポリアクリルアミド電気泳動法を用いた糖質分解酵素の基質特異性の研究

碳水化合物聚丙烯酰胺电泳研究碳水化合物降解酶的底物特异性

• 批准号: 06760070
• 负责人: 吉田 滋樹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760070/
• 关键词: 糖質分解酵素; 基質特異性; ポリアクリルアミド電気泳動; オリゴ糖

1.各種オリゴ糖の調製クマイザサ及び広葉樹キシランを酵素分解して得た糖液から、活性炭カラム、ゲル濾過、ペーパークロマトグラフィー等により各種オリゴ糖を分離した。その結果、DP=1〜10のキシロオリゴ糖、DP=3〜6のアラビノキシロオリゴ糖、DP=4〜7のグルクロノキシロオリゴ糖が得られた。2.ANTS標識及びポリアクリルアミド電気泳動法によるオリゴ糖の分析条件の検討調製した各種オリゴ糖を常法によりANTSで標識した後、様々な条件下でポリアクリルアミド電気泳動法による分析を行った。その結果、30〜40%のポリアクリルアミドグラジエントゲルを用いて400Vの定電圧で泳動することにより、DP=1〜15程度のオリゴ糖が分離できることが明らかとなった。さらに、ゲル濃度を40〜50%にした場合、全体的にサンプルの移動度は小さくなるが、各オリゴ糖の構造の差異が移動度により大きく影響した。また、グルクロン酸を含むオリゴ糖では、糖自身の電荷により中性糖よりその移動度がかなり大きくなった。一方、この分析法によるオリゴ糖の検出感度は、従来オリゴ糖の分析に用いられている薄層及びペーパークロマトグラフィーに比べて格段に高く、1nmolで明瞭なバンドが得られ、100pmolでも検出が可能であった。3.Streptomyces olivaceoviridis E-86由来のβ-1,4-キシラナーゼの基質特異性の検討クマイザサキシランにStreptomyces olivaceoviridis E-86由来のキシラナーゼを作用させ、その反応生成物の経時変化を前述したポリアクリルアミド電気泳動法で分析した。その結果、反応初期にはDP=15〜20のオリゴ糖が生成し、これがさらに酵素により分解され低分子のオリゴ糖が生成するという本酵素の作用様式が明らかとなった。またこの電気泳動法がエンド型糖質分解酵素の特異性研究に有効な分析法であることが示された。

1. All kinds of sugar preparation, such as enzyme decomposition, activated carbon purification, purification, etc. The results of the survey were as follows: DP=1 ~ 10, DP=3 ~ 6, DP = 4 ~ 7, DP = 4 ~ 7, DP=3 ~ 6, DP = 4 ~ 7, DP=4 ~ 7, DP = 3 ~ 7, DP=4 ~ 7, DP=4 ~ 7, 2. ANTS identification and analysis conditions for electrokinetic analysis under different conditions. As a result, 30 ~ 40% of the total number of particles in the sample is separated by a constant voltage of 400V, DP=1 ~ 15. In addition, when the concentration of glucose is 40 ~ 50%, the mobility of the whole glucose is small, and the structural difference of each glucose has great influence on the mobility. For example, if a sugar is present in a neutral sugar, the sugar itself may be present in a neutral sugar. The sensitivity of sugar detection in this method is higher than that in the standard range, and the sensitivity of sugar detection in the analytical method is higher than that in the analytical method. The sensitivity of sugar detection in the analytical method is higher than that in the analytical method 3. A Study on the Matrix Specificity of Streptomyces olivaceoviridis E-86 from β-1,4-trimethoprim and Its Effects on the Matrix Specificity of Streptomyces olivaceoviridis E-86 from β-1,4-trimethoprim and Its Reaction Products As a result, in the initial stage of the reaction, DP=15 ~ 20, the enzyme produces low molecular weight sugar, and the enzyme action pattern is clear. The electrokinetic method was used to study the specificity of glucose-degrading enzymes.