キメラ蛋白質を用いたアルカリプロテアーゼの安定性ならびに基質特異性の分子機能の解明

使用嵌合蛋白阐明碱性蛋白酶稳定性和底物特异性的分子功能

• 批准号: 06760067
• 负责人: 山形 洋平
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760067/
• 关键词: スブチリシン; 塩基配列; 安定性; 好アルカリ性バチルス

好アルカリ性Bacillus sp.NKS-21の生産するアルカリプロテアーゼ(スブチリシンALPI)をコードする遺伝子の全塩基配列を決定した。本遺伝子は1123bpからなる翻訳領域を持ち,374アミノ酸から成るタンパク質をコードしていた。この遺伝子をaprQと名付けた。aprQにコードされたアルカリプロテアーゼは,37アミノ酸から成るシグナル配列,65アミノ酸から成るプロ配列,および272アミノ酸から成る成熟体領域の3つの領域から構成されていた。本プロテアーゼのアミノ酸一次配列は,今までに知られている他の微生物由来のセリンプロテアーゼのものとは大きく異なり,中性のみで生育できる中性Bacillusの生産する中性スブチリシン,およびアルカリ領域でのみ生育できるアルカリ性Bacillusの生産するアルカリスブチリシンのいずれとも異なる独自のグループを形成することかを明らかにした。また,もう一つの好アルカリ性Bacillus sp.G-825-6の生産するアルカリセリンプロテアーゼ(スブチリシンSendai)を見出し本酵素の精製,諸性質の決定を行い,さらに塩基配列を決定した。この酵素はアミノ酸一次配列より典型的なアルカリスブチリシンに属するものと考えられた。本酵素は,スブチリシンALPIより高いアルカリ耐性を示した。しかし,界面活性剤に対する耐性は非常に低かった。これらの2つの新しいスブチリシンと以前に我々が見出した中性スブチリシンの一つであるスブチリシンNATの大量発現のために,枯草菌を宿主として納豆菌由来のスブチリシンNATのプロモーター領域並にシグナル領域を用いて発現系を構築した。その結果,スブチリシンSendaiは発現が可能になった。しかし,1つの酵素のみで独自のグループを形成するスブチリシンALPIは,この発現系ではほとんど発現することなく,タンパク質合成に今までに知られていない機構が必要であると考えられた。

All right, we need to know that Bacillus sp.NKS-21 is a good candidate. We need to make sure that the whole base of the column is based on the decision list. This is the first time that you 1123bp your field of study. 374% of your life is not good. I don't know what to say. I don't know if I'm going to pay for aprQ. The aprQ

项目成果

Y.Yamagata: "Subtilisin Sendai from alkalophilic Bacillussp.:Molecular and enzymatic properties of the enzyme and characterization of the gene,aprS" Enzyme and Miorobial Technology. 17. (1995)

Y.Yamagata：“来自嗜碱芽孢杆菌的仙台枯草杆菌蛋白酶：酶的分子和酶学特性以及基因的表征，aprS”酶和微生物技术。

Y.Yamagata: "A new alkaline serine protease from alkalophilic Bacillus sp.:Cloning,Sequencing and Characterization of an intracellular Protease" Current Microbiology. (印刷中). (1995)

Y. Yamagata：“一种来自嗜碱性芽孢杆菌的新型碱性丝氨酸蛋白酶：细胞内蛋白酶的克隆、测序和表征”《当代微生物学》（出版中）。

Y.Yamagata: "The structure of subtilisin ALPI from alkalophilic Bacillus sp NKS-21" Current Microbiology. (印刷中). (1995)

Y. Yamagata：“来自嗜碱芽孢杆菌 NKS-21 的枯草杆菌蛋白酶 ALPI 的结构”《当代微生物学》（出版中）。