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Bacillus brevisを用いたヒト・カルシトニンの分泌生産

使用短芽孢杆菌分泌生产人降钙素

基本信息

批准号：
06760081
负责人：
加藤雅士
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カルシトニンは体内のカルシウム代謝を調節しているペプチドホルモンである。現在、医薬として用いられるカルシトニンの大部分はヒト、ブタ、サケ、およびウナギから抽出されたり、化学的に合成されたりしている。生産コストが高いうえに、反応副産物の混入などの問題点が残されていた。申請者のグループでは、蛋白質高度生産菌、Bacillus brevisを用いた異種蛋白質分泌生産系が確立されている。高い分泌能を有し、菌体外プロテアーゼ活性の低いBasillus brevisを用いればカルシトニンの分泌生産が可能であると考えた。本研究はカルシトニンの効率の良い生産系の確立をめざし、研究に着手した。本研究で申請者らは合成DNAを連合することにより、カルシトニン遺伝子を作成した。カルシトニンの高効率分泌生産を達成するために、以下の研究を遂行した。(1)この合成遺伝子をBasillus brevisの分泌発現ベクターに組み込むことにより、カルシトニンにBacillus brevisの細胞壁蛋白質のシグナルペプチドを付加する。こうしてできた分泌プラスミドをBacillus brevisに導入し、カルシトニンを発現・分泌させた。ウエスタンブロッティングによる解析の結果、培養上清にカルシトニンのある程度の蓄積が観察された。(2)シグナルペプチド配列の最適化、分泌プラスミドの改良、宿主の育種、培養条件については十分な検討を行うことができなかった。(3)培養上清からの前駆体ペプチドの精製および得られたペプチドに酵素の作用によるカルボキシ未端のアミド化反応についても時間の都合上検討を行うことができなかった。

In addition to the above, it is also possible to adjust the temperature of the body. Now, most of the medical and chemical products are used in the field of chemical synthesis. The production of high-quality, anti-waste by-products mixed with the problem point The applicant has established a heterogenous protein secretion production system using highly protein-producing bacteria and Bacillus brevis. High secretion ability, low secretion activity in vitro and low secretion ability in vitro. This study is aimed at establishing a good production system with high efficiency. In this study, the applicant was asked to create a DNA fusion gene. The following research was carried out to achieve high secretion rate. (1)The secretion of this synthetic gene, Bacillus brevis, is a complex process involving the production of cell wall proteins from Bacillus brevis. This is the first time that Bacillus brevis has been introduced into the world. The results of analysis and accumulation of culture supernatant were observed. (2)Optimization of selection and arrangement, improvement of secretion, breeding of host and culture conditions (3)The culture supernatant was purified from the precursor and the enzyme was purified from the precursor.