糸状菌転写促進因子CCAAT結合複合体のサブユニットに関する機能ドメイン解析

丝状真菌转录启动子CCAAT结合复合物亚基的功能域分析

• 批准号: 12760052
• 负责人: 加藤 雅士
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760052/
• 关键词: 糸状菌; CCAAT; Hap; タカアミラーゼA; 転写因子; AnCP; Aspergillus nidulans; 麹菌; A.nidulans

(1)部分欠失Hapサブユニットのhap欠失株への導入:前年度ではHap複合体を形成するサブユニットHapB,C,Eそれぞれの部分欠失遺伝子を作製して、リコンビナントタンパク質を調製し、in vitroでの解析を進めてきた。本年度はこれら部分欠失遺伝子を用い、我々の開発した糸状菌cDNA発現ベクターを利用して、それぞれhapB,hapC,hapE欠失株を形質転換した。その結果HapEに関しては、中央の真核生物間の配列保存領域のみで転写促進に十分であることが分かった。in vitro実験でDNA結合能を持つことが明かとなっているHapCのN末端欠失変異(HapCdN)およびHapBのC末端欠失変異(HapBdC)はin vivoでは転写促進能を持たないことが明かとなった。さらなる解析より、細胞内のHapCdN量が極めて少ないことが明かとなり、N末部分がHapCの細胞内での安定性に関与していることが示唆された。HapBdCは転写促進能を持たないことが明らかになったが、総抽出タンパク質を用いたDNA結合実験ではDNA結合性を有することが明かとなった。DNA結合以外の機能がC末部分に存在することが示唆された。(2)部分欠失サブユニットの核への局在化能の解析:HapBdCの核への局在化能を調べるために、前年度に確立した核のフラクショネーション法により核を分離後ウェスタン解析を行った。その結果、全長HapBは効率よく核局在化するのに対し、HapBdCは核には殆ど存在していなかった。この結果より、HapBのC末部位には核への局在に必要な領域が存在することが明かとなった。

(1) part of the missing Hap gene is missing. The hap missing plant is imported: in the previous year, the Hap complex was formed. The missing part of the HapB,C,E gene was used as the carrier. The missing part of the gene was used as the carrier, the in vitro was analyzed and analyzed. This year, some of the missing plants are in short supply, and we have started to use the bacteria cDNA in the current year. In this year, we have made full use of the missing plants, and the missing plants of hapB,hapC,hapE have been affected. The results show that the distribution of information between eukaryotes in the HapE and central eukaryotes is very important in the field of conservation. The combination of in vitro and DNA can improve the accuracy of N-terminal loss of HapC (HapCdN), HapB of C-terminal deletion (HapBdC), and in vivo write-up. HapCdN analysis, intracellular HapCdN analysis, intracellular stability, and instigation. HapBdC can improve the performance of the system by using the combination of DNA and DNA in order to improve the performance. Except for the combination of DNA and other mechanisms, there is an indication of instigation at the end of the test. (2) part of the missing information is due to the analysis of the Chemical Energy Bureau: the HapBdC Nuclear Bureau is responsible for the analysis of the chemical energy industry and the previous year. The results and the full-length HapB performance rate show that there are significant differences in the performance of the Nuclear Bureau of Chemical Engineering and HapBdC. The results show that at the end of HapB

项目成果

Tanaka,A.: "An Aspergillus oryzae CCAAT-binding protein, AoCP, is involved in the high-level expression of Taka-amylase A gene."Current Genetics. 37. 380-387 (2000)

Tanaka,A.：“米曲霉 CCAAT 结合蛋白 AoCP 参与 Taka-淀粉酶 A 基因的高水平表达。”《当代遗传学》。

Kato M.: "No factors except for the Hap complex enhance the Taka-amylase A gene expression by binding to the CCAAT sequence in the promoter region"Biosci. Biotechnol. Biochem.. 65. 2340-2342 (2001)

Kato M.：“除了 Hap 复合体之外，没有任何因素通过与启动子区域中的 CCAAT 序列结合来增强 Taka-淀粉酶 A 基因表达”Biosci。

Tani,S.: "A novel nuclear factor, SREB, binds to a cis-acting element, SRE, required for inducible expression of the Aspergillus oryzae Taka-amylase A gene in A.nidulans."Molecular and General Genetics. 263. 232-238 (2000)

Tani,S.：“一种新型核因子 SREB 与顺式作用元件 SRE 结合，这是米曲霉 Taka-淀粉酶 A 基因在构巢曲霉中诱导表达所必需的。”《分子与普通遗传学》。

Tani S.: "Characterization of the amyR gene encoding a transcriptional activator for the amylase genes in Aspergillus nidulans"Current Genetics. 39. 10-15 (2001)

Tani S.：“编码构巢曲霉中淀粉酶基因转录激活因子的amyR基因的表征”《当代遗传学》。

加藤雅士: "カビの有用酵素生産に関与する転写因子"化学と生物. 39. 40-46 (2001)

Masashi Kato：“转录因子参与霉菌中有用酶的产生”，《化学与生物学》39. 40-46 (2001)。