嫌気条件下でのチフス菌Vi抗原の発現調節機構の解析

厌氧条件下伤寒沙门氏菌Vi抗原表达调控机制分析

• 批准号: 06770199
• 负责人: 橋本 安弘
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770199/
• 关键词: Salmonella; Vi抗原; 調節遺伝子

チフス菌のVi抗原はこの菌の重要な病原因子として広く知られてきたが、その発現に影響を与える環境因子について殆ど知られていなかった。我々は種々の培養条件下でVi抗原産生について解析した結果、嫌気条件下でVi抗原の産生が促進されることを明かにした。この発現調節機構を解析するため相同性組み換えを利用してチフス菌の染色体上のVi多糖生合成遺伝子vipAにレポタ-遺伝子(CAT)を挿入した変異株を作製した。この変異株をもちい培養条件の違いによるVi遺伝子の転写量を比較した結果、好気培養に比べ嫌気培養では3倍以上Vi遺伝子の転写量が増加することがわかった。またVi多糖の産生に必要な10の遺伝子群はオペロン構造を持つことから、このオペロン上流の調節領域が培養条件による発現調節に重要な役割を果たしていると考えられた。このオペロンの先頭に位置するvipR遺伝子を破壊した株ではこのオペロン全体の転写が100倍以上低下したが、vipRの再導入により転写量が回復した。vipRの推定アミノ酸配列からこの遺伝子産物は21000の塩基性蛋白であり、C末端にヘリックス-ターン-ヘリックスの構造をもつ。vipRを大腸菌で大量に発現させ、粗抽出液を使いゲルシフトアッセイによるDNA結合実験をおこなった結果、vipR産物はオペロン上流の調節領域に結合することがわかった。vipRはこのオペロン内にコードされているが、vipR産物によりこのオペロンが正に発現制御されていることが明かとなった。vipR産物を大量に発現させたチフス菌では培養条件に拘わらずViを多量に産生したことから、vipR産物が嫌気条件でのVi抗原産生に関与している可能性が示唆された。

チ フ ス bacteria の Vi antigen は こ の bacteria の な important pathogenic factor と し て hiroo く know ら れ て き た が, そ の 発 に influence を and え る environmental factors に つ い て perilous ど know ら れ て い な か っ た. I 々 は kind 々 の culture conditions で Vi antigen to produce に つ い て parsing し た results, under the condition of suspicion 気 で Vi antigen の produce が promote さ れ る こ と を Ming か に し た. こ の 発 now adjusting mechanism を parsing す る た め み identity group in え を using し て チ フ ス bacteria の chromosome の Vi polysaccharide biosynthesis heritage 伝 son vipA に レ ポ タ - heritage 伝 child (CAT) を scions into し た - different strains を cropping し た. こ の - different strains を も ち の violations い い cultivation conditions に よ る Vi posthumous son 伝 の を planning write quantity comparing し た results, good 気 cultivation than べ に suspicion 気 で は traces of more than 3 times the Vi son 伝 の planning write in が raised add す る こ と が わ か っ た. ま た Vi polysaccharide の produce に な 10 necessary の heritage 伝 subgroup は オ ペ ロ ン tectonic を hold つ こ と か ら, こ の オ ペ ロ ン upper の が training conditions in regulating に よ る 発 now important な に "を cut fruit た し て い る と exam え ら れ た. こ の オ ペ ロ ン の vanguard position に す る vipR posthumous son 伝 を broken 壊 し た strains で は こ の オ ペ ロ ン all の planning write が 100 times more low し た が, vipR の to import に よ り planning write quantity が response し た. Presumption vipR の ア ミ ノ acid with column か ら こ の heritage 伝 zi chan content は 21000 の salt basic protein で あ り, C terminal に ヘ リ ッ ク ス - タ ー ン - ヘ リ ッ ク ス の tectonic を も つ. VipR を coliform で large に 発 now さ せ, crude extract を make い ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ に よ る dna-binding be 験 を お こ な っ た results, product vipR は オ ペ ロ ン upper に の adjust field combining す る こ と が わ か っ た. Within the vipR は こ の オ ペ ロ ン に コ ー ド さ れ て い る が, vipR product に よ り こ の オ ペ ロ ン が is に 発 now suppression さ れ て い る こ と が Ming か と な っ た. VipR product を large に 発 now さ せ た チ フ ス bacteria で は culture conditions に detained わ ら ず Vi を に produce abundant し た こ と か ら, product vipR が suspicion 気 condition で の Vi antigen to produce に masato and し て い が る possibility in stopping さ れ た.