チフス菌 Vi多糖の生合成に関する研究

伤寒沙门氏菌Vi多糖的生物合成研究

• 批准号: 09770176
• 负责人: 橋本 安弘
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770176/
• 关键词: サルモネラ; 莢膜; 多糖体; 多糖

チフス菌の病原因子として重要なvi多糖体(Gal NAcAからなるホモポリマー)の生合成に必要な4つの遺伝子のうち、vipA産物の機能について解析した。vipA遺伝をtacプロモーター下流にクローニングし、大腸菌XL1-Blueに導入、IPTGで誘導しvipA産物を大量発現させた。菌体をソニケートで破壊、遠心し上清を粗酵素液として使用した。これをNAD存在下で低濃度のUDP-GlcNAc(20μM)と30Cで反応させると、新規化合物が形成されることがわかった。化合物のろ紙クロマトグラフィー上での移動度を調べたところUDP-GlcNAcからPseudomonas ATCC25020の菌体抽出液を作用して作製した UDP-GlcNAcA標品と同じ移動度を示すことがわかった。またカルボジイミドで還元後、ホスホジエステラーゼ、アルカリホスファターゼで処理すると、GlcNAc標品と同じ移動を示したことから、この化合物をUDP-GlcNAcAと同定し、vipA産物はUDP-GlcNAc dehydrogenase活性を示すことがわかった。この酵素の至適pHは9.0で0.1M以上の硫酸アンモニウムにより活性化され0.1mM p-Chloromercuribenzoateにより阻害されることからMicrococcus luteus由来の同酵素と類似の性状を示すことがわかった。また抽出液を種々の濃度のUDP-GlcNAcと作用させると、0.5mM以上ではアッセイ系に含まれるUDP-GlcNAc-2-epimeraseとUDP-ManNAcA dehydroqenaseの影響を強くうけ主にUDP-ManNAcAの生成がみられた。これらの酵素をコードする遺伝子rffE、rffDをTn10で不活化した大腸菌をプラスミドホストに使用することでこの影響を除くことができた。

チ フ ス bacteria の pathogenic factor と し て important な vi polysaccharide substance (Gal the committee か ら な る ホ モ ポ リ マ ー) の biosynthesis に necessary な 4 つ の posthumous son 伝 の う ち, の vipA product functional に つ い て parsing し た. VipA heritage 伝 を tac プ ロ モ ー タ ー obscene に ク ロ ー ニ ン グ し, coliform XL1 - Blue に import, IPTG induced し で vipA product を large 発 now さ せ た. The bacterial cells をソニケ をソニケ トで トで are broken through 壊, the supernatant of the telecentric <s:1> is を, and the crude enzyme solution is と て and used is た た. こ れ を で low concentration in the presence of NAD の UDP - GlcNAc (20 microns) と 30 c で anti 応 さ せ る と, new rules compound が form さ れ る こ と が わ か っ た. Compound の ろ paper ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー on で の を mobile degrees adjustable べ た と こ ろ UDP - GlcNAc か ら Pseudomonas ATCC25020 の bacteria extract を role し て cropping し た UDP - GlcNAcA standard product with じ と mobile を shown す こ と が わ か っ た. ま た カ ル ボ ジ イ ミ ド で after yuan, ホ ス ホ ジ エ ス テ ラ ー ゼ, ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ で 処 Richard す る と, GlcNAc standard product with じ と mobile を shown し た こ と か ら, こ の compound を UDP - GlcNAcA と with し, は UDP - GlcNAc vipA products dehydrogenase activity を indicates す とがわ とがわ った. の こ の enzyme to optimum pH は で 9.0 0.1 M above の sulfate ア ン モ ニ ウ ム に よ り activeness さ れ p - 0.1 mM Chloromercuribenzoate に よ り resistance against さ れ る こ と か ら Micrococcus luteus origin の を と の similar traits with enzyme and shown す こ と が わ か っ た. ま た extract を kind 々 の concentration の UDP - GlcNAc と role さ せ る と, 0.5 mM above で は ア ッ セ イ system contains に ま れ る UDP - GlcNAc - 2 - epimerase と UDP - ManNAcA dehydroqenase <s:1> affects を strong くうけ master にUDP-ManNAcA <s:1> generation がみられた. こ れ ら の enzyme を コ ー ド す る heritage 伝 rffE, rffD を Tn10 で inactive し た coliform を プ ラ ス ミ ド ホ ス ト に use す る こ と で こ の influence を except く こ と が で き た.

项目成果

橋本安弘: "チフス菌のVi抗原の遺伝子の解析とその発現調節に関する研究" 日本細菌学雑誌. 52・4. 649-657 (1997)

Yasuhiro Hashimoto：“伤寒沙门氏菌Vi抗原基因的分析及其表达调控的研究”日本细菌学杂志52・4（1997）。

Yasuhiro Hashimoto: "Comparison of ViaB region of Vi-positive organisms" FEMS Microbiol.Lett.157. 55-57 (1997)

Yasuhiro Hashimoto：“Vi 阳性生物体的 ViaB 区域的比较”FEMS Microbiol.Lett.157。