胎生期造血における受容体型チロシンキナーゼの機能

受体酪氨酸激酶在胚胎造血中的作用

• 批准号: 06770242
• 负责人: 小川 峰太郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770242/
• 关键词: FLK-2; チロシンキナーゼ; モノクローナル抗体; 血液幹細胞; c-KIT; リガンド

これまでに、c-Kitの機能を阻害する抗体c-Kitモノクローナル抗体をマウス胎仔に投与することにより、胎生13日以後の胎仔肝と胎仔骨髄における血液幹細胞の増殖にc-Kitが必須の役割を果たしていることを示した。さらに、胎生12日以前の胎仔肝と卵黄嚢では血液幹細胞はc-Kit依存しないで増殖することも明らかにしてきた。このようなc-Kitの機能に依存しない胎生初期の造血を調節する仕組みを解明するためには、血液幹細胞が発現するc-Kit以外の受容体型チロシンキナーゼの役割を理解する必要がある。胎生期の血液幹細胞が発現する受容体型チロシンキナーゼとしてFlk-2が知られている。Flk-2の分子構造はc-Kitのそれと非常に類似しているため胎生初期造血を調節する分子の重要な候補として挙げられ、その機能の解明が待たれている。本研究では、Flk-2に対する特異的阻害抗体を作製しFlk-2の機能を解析することを目的とした。flk-2遺伝子産物を細胞表面に発現するミエローマ細胞株を樹立し、この細胞株を特異的に認識する2種類のモノクローナル抗体を作製した(A2F4、A2F10)。同時に、Flk-2のリガンドであるFLT3LのN末端部にヒトc-MycのC末端アミノ酸配列を結合したキメラ蛋白をCOS1細胞に産生させ、これをFlk-2のリガンド結合試験に供した。樹立された抗体のサブクラスはA2F4、A2F10ともにγ2a.χで、約150kDの細胞表面蛋白を免疫沈降させる。Myc-Tagを連結したFLT3Lを用いてフローサイトメトリーによりM1細胞のFLT3L結合試験をおこなったところ、A2F4はFlk-2とFLT3Lの会合を阻害しないがA2F10はこれを阻害することがわかった。このことよりこれらの抗体はFlk-2の細胞外ドメインを認識する抗体であると結論した。今後、阻害活性を有するA2F10抗体を重点的に用いて、Flk-2のin vivoにおける機能について解析を進める。

The anti-c-Kit antibody and c-Kit antibody were able to prevent the infection of c-Kit antibody. After 13 days of birth, the fetal liver and fetal bone were born in the fetal liver and the blood of the baby was born after the 13th day. The c-Kit must be excised in service. Before 12 days of birth, fetal liver, yolk, blood, c-Kit-dependent cells, colonization, pregnancy, pregnancy, egg yolk, blood, blood, fetal liver, egg yolk, blood, blood, fetal liver, egg yolk, yolk, blood, blood, fetal liver, egg yolk, blood, In the early stage of fetal life, the hematopoietic c-Kit mechanism is highly dependent on the understanding of hematopoiesis in the early stage of fetal life. The blood cells show that there is a capacitive somatotype other than c-Kit. During the prenatal period, the blood cells showed that the receptive body type was known to be different from that of the Flk-2. Flk-2 molecules are very important for the production of c-Kit antigens in the early stage of fetal life. In this study, the specific blocking antibodies of Flk-2 antibody were used as Flk-2 antibodies to analyze the purpose of this study. On the cell surface of flk-2 spores, it was found that the cell lines were isolated, and the specific antibodies of the cells were detected by Elisa (A2F4, A2F10). At the same time, Flk-2 sequencing showed that the N-terminal of FLT3L was linked to c-Myc C-terminal trypsin, which combined with the recombinant protein, COS1, which was used to generate DNA, and Flk-2 sequencing was used to combine the DNA sequence. A2F4, A2F10, γ 2a. χ, 150kD, cell surface protein, immunoprecipitation, immunoprecipitation, etc. The Myc-Tag link