歯牙および骨組織における神経機能の分子生物学的解析

牙齿和骨组织神经功能的分子生物学分析

• 批准号: 06857139
• 负责人: 中西 徹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857139/
• 关键词: 骨芽細胞; 神経成長因子; ニューロトロフィン; PCR; trk; 遺伝子発現

代表的な神経成長因子ファミリー(ニューロトロフィン)NGF、BDNFおよびNT-3の受容体(trk)のマウス骨芽細胞株MC3T3-E1における発現について検討した。3者に共通の塩基配列部分でプライマーを作製し、RT-PCRを行ったところ、目的のPCR産物を検出し、そのDNA断片の塩基配列を決定した結果、trkCであることが判明した。MC3T3-E1におけるtrkCの発現は、細胞の増殖期に最も強くみられた。また、trkCの変異体遺伝子であるC14(アミノ酸14個が挿入されたもの)もMC3T3-E1で発現していることが明らかとなった。MC3T3-E1で発現するtrkCの生理的機能について解析するため、MC3T3-E1培養系にtrkCのリガンドであるNT-3を添加したところ、濃度依存的にMC3T3-E1の増殖が促進されることがわかった。また、細胞内Ca^<2+>濃度測定により細胞膜でNT-3とtrkCの結合によると思われるCa^<2+>流入がおきることが確認された。さらにこの増殖促進作用は抗NT-3抗体や抗trkC抗体によって阻害されることからNT-3のtrkCへの結合による直接作用であることが判明した。このように昨年度からの一連の本研究によって代表的神経栄養因子であるニューロトロフィンが骨芽細胞株で産生され、そのうちの一つNT-3は骨芽細胞株自身がもつその受容体TRKCにオートクリン的に作用し、骨芽細胞の増殖を誘導することが明らかとなった。ニューロトロフィン、特にNT-3の非神経的な新しい作用の発現は骨系細胞においてはもちろん末梢系全体でみても初めての例で、NT-3は骨代謝における初期段階で骨形成を促進するものと考えられる。

The expression of NGF, BDNF and NT-3 in bone bud cell line MC3T3-E1 was investigated. 3. The gene sequence of the target DNA fragment was determined by PCR, RT-PCR and PCR. The discovery of trkC in MC3T3-E1 is the strongest during the proliferation period of cells. T3-E1 is a new type of MC3 T3-E1. The growth of MC3T3-E1 was enhanced by the addition of NT-3 in MC3T3-E1 culture line. Determination of intracellular Ca^<2+> concentration in the cell membrane and determination of Ca^<2+> influx in the cell membrane The proliferation promotion effect of anti-NT-3 antibody and anti-trkC antibody was found to be directly related to the binding of NT-3 and trkC. In the past year, a series of studies have been conducted on the role of NT-3 in the induction of bone bud cell proliferation by bone bud cell line itself. The discovery of the non-neuropathic effects of NT-3, especially NT-3, can be seen in the entire peripheral system of bone cells. For example, NT-3 promotes bone formation in the early stages of bone metabolism.

项目成果

中西 徹: "マウス骨芽細胞株における神経成長因子ファミリー蛋白質(ニューロトロフィン)受容体の発現と構造" 第67回日本生化学会大会要旨集. 66. 764- (1994)

Toru Nakanishi：“小鼠成骨细胞系中神经生长因子家族蛋白（神经营养蛋白）受体的表达和结构”第 67 届日本生化学会年会论文集 66. 764-（1994）。

T.Nakanishi: "Neurotrophin-3 stimulates proliferation of osteoblasts via TRKC in an autocrine manner." Bone.16. 220- (1995)

T.Nakanishi：“Neurotropin-3 通过 TRKC 以自分泌方式刺激成骨细胞增殖。”

中西 徹: "マウス骨芽細胞株における神経栄養因子およびその受容体の発現と機能解析" 第36回歯科基礎医学会抄録集. 36. 87- (1994)

Toru Nakanishi：“小鼠成骨细胞系中神经营养因子及其受体的表达和功能分析”第 36 届基础牙科医学学会摘要 36. 87- (1994)。

T.Nakanishi: "Expression of trkC in a mouse osteoblastic cell line and its response to neurotrophin-3." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 1268-1274 (1994)

T.Nakanishi：“trkC 在小鼠成骨细胞系中的表达及其对神经营养素 3 的反应。”

中西 徹: "マウス骨芽細胞株におけるtrkCの発現とニューロトロフィン3に対する応答" 第17回日本分子生物学会年会要旨集. 427- (1994)

Toru Nakanishi：“小鼠成骨细胞系中 trkC 的表达和对神经营养素 3 的反应”日本分子生物学会第 17 届年会记录 427-（1994 年）。