内在性カンナビノイド受容体リガンド・アナンダミドの微量分離定量法の開発

内源性大麻素受体配体anandamide微分离定量方法的建立

• 批准号: 07772130
• 负责人: 三田 智文
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772130/
• 关键词: アナンダミド; カンナビノイド; 高速液体クロマトグラフィー; 蛍光

内在性カンナビノイド受容体リガンド・アラキドニルエタノールアミド(アナンダミド)の高感度分離定量法を開発した。アナンダミドはアルコール基を有するので、ベンゾフラザン骨格を有するアルコール類の蛍光標識化試薬であるDBD-COClを用いて標識化した。標識化反応はベンゼン溶液中、60℃、40分で定量的に進行することが明かになった。反応終了後、反応液を高速液体クロマトグラフィーにより分離・定量した。分離には逆相カラムを用い、また検出には蛍光検出器を用いた。この結果、この方法によりアナンダミドの検出限界は20フェムトモル/注入量という極微量で検出可能となった。また、アナンダミドのアラキドン酸部分がパルミチン酸、オレイン酸、エイコサペンタノイル酸に変化したアナンダミド類縁体もこの方法で同様に分離検出可能であり、これらの類縁体は相互に良好に分離可能であった。これらの結果を裏面に示す論文として発表した。次に、ラット脳内からアナンダミドを抽出し脳内アナンダミドを定量することを試みた。まず、ラット脳からFolch法により総脂質画分を抽出した後、アセトン沈澱法により抽出物を精製した。次にこの試料を蛍光標識化せずに直接検出する方法を検討した。直接検出法には、高速液体クロマトグラフィー-大気圧化学イオン化質量分析法を用いた。この方法により脳内アナンダミドを標識化することなく直接定量することが可能になった。そこでラット脳を大脳、小脳、海馬などの部位に分け、各々の部位におけるアナンダミドおよびその類縁体を定量した。また、これらの部位のアナンダミド量はラット週齢の週齢によって差がみられた。これらの結果は日本薬学会第116年会において発表予定である。

Development of a high sensitivity quantitative method for the separation of intrinsic receptors For example, DBD-COCl can be used to identify all kinds of optical elements. The labeling reaction is carried out in an aqueous solution at 60 ° C for 40 minutes. After the end of the reaction, the reaction liquid is separated and quantified. The separation of the reverse phase is used, and the detection of the reverse phase is used The results show that the detection limit of this method is not 20%, the injection amount is not 20%, and the detection possibility is not 20%. In this way, it is possible to separate the same kind of substances from each other well. The results of this study are shown in the table below. The second is to try to reduce the amount of oil in the tank. The extract was purified by the following method: Folch method, extraction of lipid fraction, precipitation method. This article discusses the method of direct detection of the sample by light identification. Direct analysis, high speed liquid chromatography, high pressure chemical analysis This method is easy to identify and quantify. For each part of the body, the size of the body, the size of the hippocampus, and the size of the body. The amount of water in the water is equal to the amount of water in the water. The results of this study were presented at the 116th Annual Meeting of the Japan Institute of Medicine.

项目成果

Koga Daisuke: "High-Performance Liquid Chromatography and Fluorometric Detection of Arachidonylethanolamide (Anandamide) and its Analogs, Derivatized with DBD-COCl" Biomedical Chromatography. 9. 56-57 (1995)

Koga Daisuke：“花生四烯乙醇酰胺（Anandamide）及其类似物的高效液相色谱和荧光检测，用 DBD-COCl 衍生”生物医学色谱。