权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

神経細胞に特異的な糖タンパク質に関する分子生物学的研究

神经细胞特异性糖蛋白的分子生物学研究

基本信息

批准号：
07772166
负责人：
岡昌吾
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772166/
关键词：
神経細胞糖鎖抗原西洋ワサビペルオキシダーゼ昆虫

项目摘要

1)糖タンパク質の精製および部分アミノ酸配列の決定凍結乾燥したイナゴ頭部を、クロロホルム/メタノールで脱脂後、0.9%塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液(PBS)で糖タンパク質を抽出した。この抽出物を材料に、ウエスタンブロットにおける抗HRP抗体との反応性を指標として、硫安分画、ConAカラム、抗HRP抗体を固定化したアフィニティーカラムにかけ、最終的に調製用電気泳動で分画し、43kDaおよび35kDaの糖タンパク質を精製した。ペプチドシークエンサーにより、この35kDaの糖タンパク質のアミノ末端より20残基のアミノ酸配列を決定した。またこの35kDa糖タンパク質をリシルエンドペプチダーゼで消化後、逆相HPLCで分離したペプチド画分についてアミノ酸配列を決定した。2)糖鎖の精製および構造決定精製した43kDa糖タンパク質をヒドラジン分解で糖鎖を切り出し、還元末端を2-アミノピリジンと反応させピリジルアミノ化(PA化)することにより蛍光標識した。このPA化糖鎖を、逆相カラム、アミドカラムを用いて分画し、数種の画分を得た。そのうちの主要な画分が、HPLCにおいてHRP糖鎖とよく似た挙動を示したので、この画分が抗HRP抗体と反応性を示す糖鎖であると思われた。そこでこの画分を、イオンスプレー式質量分析計を用い、MSおよびMS/MS分析を行った結果、HRP糖鎖と同じパターンを示した。また、この糖鎖を600MHz1H-NMRで測定した結果、HRP糖鎖と同じパターンを示した。このことより、イナゴの神経系に発現している、抗HRP抗体と反応性を示す糖鎖は、HRP糖鎖と同じ構造であることが示唆された。

1) after the fat has been removed, 0.9% of the solution contains the acid solution (PBS), the sugar solution (PBS), the sugar extract (the extract). The material of the extract, the anti-HRP antibody, the anti-HRP antibody, the thioampere fraction, the ConA antibody, the immobilized anti-HRP antibody, the most sensitive electrophoretic chromatography, the most sensitive electrophoretic chromatography, the 43kDa electrophoretic chromatography, the anti-Thioampere immobilization, the anti-Thioampere, the immobilization of anti-Thioampere, the immobilization of anti-Thioampere, the most sensitive electrophoretic device, the most popular electrophoretic assay, the most sensitive electrophoretic assay, the 35kDa, sugar, sugar, After digestion, the reverse phase HPLC was separated and separated. After digestion, the acid column was determined. 2) the determination of sugar, 43kDa, sugar, sugar Use PA to make sugar, reverse phase, reverse phase, and so on. Several kinds of pictures are divided into different parts. The main parts of the picture, HPLC, HRP, sugar, and anti-HRP antibodies show that the reactivity of the anti-glucose antibody is similar to that of the anti-glucose antibody. The results of the MS/MS analysis, the results of the MS/MS analysis, and the results of the HRP sugar analysis were shown in the same way as in the same sample. The results of 600MHz1H-NMR test and the results of HRP sugar test show the same as that of other sugar tests. The anti-HRP antibody reactivity shows that the sugar is present, and the HRP sugar is the same as that of the drug.