权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

HNK-1糖鎖合成遺伝子を分子プローブとした神経系特異的糖鎖の機能解析

使用 HNK-1 聚糖合成基因作为分子探针进行神经系统特异性聚糖的功能分析

基本信息

批准号：
15390025
负责人：
岡昌吾
金额：
$ 8.38万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

単クローン抗体HNK-1により認識されるHNK-1糖鎖は、神経系に存在するNCAM, L1, P0などの細胞接着分子に特徴的に発現し、神経の初期発生段階、神経回路の形成段階および神経回路の維持など様々な過程において重要な働きを持つことが示されてきており注目されている。本研究において、現在までに得られているこれらHNK-1糖鎖合成に関与する遺伝子や遺伝子改変動物を用いて以下のことを明らかにした。1)HNK-1糖鎖合成酵素遺伝子を用いたHNK-1糖鎖の発現調節機構の解明HNK-1糖鎖発現の律速酵素であるGlcAT-PとGlcAT-Sの基質認識機構を生化学的、構造生物学的に明らかにするために、大腸菌を用いてGlcAT-PおよびGlcAT-Sの膜貫通領域を欠失させた可溶型酵素タンパク質の大量発現系を確立し、その基質特異性を様々な糖鎖に対する糖転移活性を測定したところGlcAT-Pは糖鎖末端に存在する2糖を厳密に認識するのに対し、GlcAT-Sはより大きな糖鎖構造を認識することが明らかとなった。またGlcAT-Pに関しては、結晶が得られ、そのX線結晶構造解析が進んでいる(高エネルギー加速研究所との共同研究)。2)HNK-1糖鎖合成酵素遺伝子欠損マウスの作製とその解析既に得られているGlcAT-P遺伝子欠損マウスにおいて、一部HNK-1糖鎖発現が残存していた。この残存するHNK-1糖鎖の機能を明らかにするため、もう一つのHNK-1糖鎖合成遺伝子であるGlcA-Sの遺伝子欠損マウスの作製を行った。ターゲッティングベクターをES細胞に導入後、相同組み替えES細胞をマウス杯盤胞に導入し、キメラマウスの作成に成功した。さらにキメラマウスとC57BL6マウスとの交配によりヘテロ変異マウスが得られた。現在ヘテロ変異マウス同士の交配によりホモ変異マウスを得、その表現型を解析している。

HNK-1 antibody is recognized as an important part of the development of NCAM, L1, P0 and cell adhesion molecule characteristics in the early stages of the development of the brain, the stages of formation of the brain circuit, and the maintenance of the brain circuit. In this study, we found that HNK-1 glycan synthesis is related to genetic modification of animals. 1)HNK-1 Glycolock Synthase Fragment and HNK-1 Glycolock Expression Regulation Mechanism; GlcAT-P and GlcAT-S Matrix Recognition Mechanism; Biochemical and Structural Biology; Escherichia coli; GlcAT-P and GlcAT-S Membrane Penetration Domain; Soluble Enzyme Fragment and Mass Expression System; The substrate specificity of GlcAT-P is determined by the presence of 2 sugars at the end of GlcAT-P. GlcAT-P is related to crystallization and X-ray crystal structure analysis.(Joint research by Takayama Institute of Acceleration). 2)HNK-1 Glycolock Synthase Deficiency and Its Production and Analysis The function of the HNK-1 glycan lock is clearly defined. The function of the HNK-1 glycan lock is clearly defined. The function of the HNK-1 glycan lock is defined. After the ES cells were introduced, the same group of ES cells were successfully introduced and prepared. C57BL6 is the best way to get started. Now the phenotype analysis of different species is carried out.