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細胞相互作用におけるHNK-1糖鎖抗原の役割に関する研究

HNK-1糖抗原在细胞相互作用中的作用研究

基本信息

批准号：
10178205
负责人：
岡昌吾
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、細胞表面や細胞外マトリックスの糖タンパク質や糖脂質に含まれる糖鎖が、神経細胞の細胞間相互作用に重要な働きをすることが示されてきている。なかでも、単クローン抗体HNK-1により認識されるHNK-1糖鎖抗原は、昆虫から哺乳動物まで広く神経系組織に分布し、神経の初期発生段階、神経回路の形成段階および神経回路の維持など様々な過程において重要な働きを持つことが明らかにされてきており注目されている。我々は本抗原の機能を分子レベルで直接的に証明するすることを目的とし、現在までにその生合成調節酵素の中心的役割を担うグルクロン酸転移酵素(GlcAT-P)の単離、遺伝子のクローニングに成功している。今回、本遺伝子を用いて培養細胞にHNK-1糖鎖抗原を強制的に発現させることにより、以下に示す知見が得られた。1) HNK-1糖鎖抗原の細胞間相互作用におよぼす影響GlcAT-P遺伝子を一過性に導入することにより、COS細胞やC6グリオーマ細胞の細胞表面にHNK-1糖鎖抗原の発現を誘導することができることを既に見いだしている。そこで細胞間相互作用におけるHNK-1糖鎖抗原の役割を調べるため、GlcAT-PcDNAを安定形質導入したC6グリオーマ細胞を作成し、HNK-1糖鎖抗原発現によるこれら細胞間の接着性の変化を解析した。その結果、HNK-1糖鎖抗原を発現している細胞はもとの細胞に比べ細胞間の相互作用が著しく弱まることが明らかとなった。またHNK-1糖鎖抗原を発現するC6グリオーマ細胞を用いてHNK-1糖鎖抗原の発現している分子を解析した結果、NCAMやL1に発現していることが明らかとなった。2) HNK-1糖鎖抗原の細胞形態変化に及ぼす影響GlcAT-P遺伝子を一過性に導入することにより、COS細胞が著しい形態変化を起こすことを見いだしている。そこでGlcAT-P遺伝子の発現をデキサメタゾンにより誘導できる細胞株を樹立し、HNK-1糖鎖抗原の発現をコントロールできる系を確立した。その結果、デキサメタゾン処理により細胞表面にHNK-1糖鎖抗原の発現が誘導され、細胞の突起伸展が起こることが確認された。現在この系を用いてHNK-1糖鎖抗原発現による突起伸展の機構を解析している。

In recent years, cell surface and extracellular sugar, sugar, lipid, sugar chain, and cell-to-cell interaction have been shown to be important. The HNK-1 glycan lock antigen is recognized in insects, mammals, and tissues of the nervous system. It is important for the early stages of the development of the nervous system, the stages of the formation of the nervous circuit, and the maintenance of the nervous circuit. We have demonstrated directly that the function of this antigen is related to molecular interaction, and now we are involved in the activity of the center of biosynthesis regulatory enzymes. We have successfully isolated and cloned GlcAT-P. In this paper, we found that the expression of HNK-1 glycan antigen in cultured cells was significantly lower than that in normal cells. 1)Cell-to-cell interaction of HNK-1 glycan lock antigen affects transient introduction of GlcAT-P gene into COS cells and C6 cells and induces expression of HNK-1 glycan lock antigen on cell surfaces. The regulation of HNK-1 glycogen binding by cell-to-cell interaction, the introduction of GlcAT-P cDNA into C6 cells and the analysis of HNK-1 glycogen binding by cell-to-cell interaction As a result, the expression of HNK-1 glycan antigen in cells is weaker than that in cell-to-cell interactions The expression of HNK-1 glycan antigen in C6 cells was analyzed by molecular analysis, and the expression of NCAM and L1 was analyzed by molecular analysis. 2)HNK-1 Glycolock Antigen Cell Morphological Change and Its Effects on GlcAT-P Gene Transient Introduction in COS Cells The expression of GlcAT-P gene was detected by induction of HNK-1 glycogen and the expression of HNK-1 glycogen was established. The results showed that the expression of HNK-1 glycan antigen on cell surface was induced and the elongation of cell processes was confirmed. The present study is aimed at analyzing the mechanism of protrusion extension in the development of HNK-1 glycogen.