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未分化胚性腫瘍細胞特異的転写調節因子の解析

未分化胚胎肿瘤细胞特异性转录调节因子的分析

基本信息

批准号：
07780669
负责人：
根岸文子
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Sasaki Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780669/
关键词：
胚性腫瘍細胞分化転写因子

项目摘要

未分化胚性腫瘍細胞特異的エンハンサーBOXDNAとその結合タンパク質の機能を明らかにするために以下の解析を行った。1.BOXDNA結合タンパク質の標的遺伝子(BOXF1)のクローニング未分化胚性腫瘍細胞F9のcDNAライブラリーから調整したcDNAをテンペレートとしBOXF1内に設定したオリゴマーとoligo(dT)をプライマーとして用いたPCR法を行った。残念ながら、BOXDNAを転写調節領域内に持つcDNAは得られなかったが、分化に伴って発現の減少するcDNAが得られた。塩基配列解析よりこのcDNAがマウスピルビン酸キナーゼM-2であることがわかった。ラットの初期胚や肝がん細胞でこの遺伝子の発現と未分化状態との関連性が報告されており、本研究はピルビン酸キナーゼM-2が未分化状態で広く働いていることを示唆するものと思われる。本研究の成果は、Biochmica et Biophysica Acta 1267(1995)135-138に報告した。2.BOXDNA結合タンパク質の精製未分化胚性腫瘍細胞P19細胞より、BOXDNA結合タンパク質の精製を試みた。得られた最終精製物が少量であったため充分な解析は行えなかったが、BOXDNA結合タンパク質の分子量が約45kDaであること、BOXDNA結合タンパク質複合体にはβ-アクチン様タンパク質が含まれることが示唆された。3.TEF-1ファミリーとの相同性を利用したBOXDNA結合タンパク質のクローニング BOXDNA結合タンパク質は、そのDNA結合配列の相同性から、TEF-1ファミリーであることが推測される。stringencyを下げたノーザン法を行ったところ、P19細胞の分化が進むにつれて新たなTEF-1ファミリーと推定されるバンドが検出された。現在、degenerateなプライマーを用いたPCR法により胚性腫瘍細胞に特異的なTEF-1ファミリーのクローニングを行っている。

Undifferentiated embryonic tumor cell-specific DNA binding protein function analysis 1. BOXDNA binding to the target gene (BOXF1) was detected by PCR in undifferentiated embryonic tumor cell F9. The cDNA that remains in the regulatory domain of BOX DNA is derived from the cDNA that is produced and differentiated. The gene sequence analysis of the cDNA The relationship between the development and undifferentiated state of the early embryonic liver cells was reported. This study aimed to show the relationship between the development and undifferentiated state of the early embryonic liver cells. Biochmica et Biophysica Acta 1267(1995)135-138. 2. Purification of BOX-DNA binding protein from P19 cells The final purified product was obtained with a small amount of BOXDNA-binding protein and a molecular weight of about 45kDa. The BOXDNA-binding protein complex contained a small amount of BOXDNA. 3. The identity of TEF-1 is utilized to analyze the identity of BOXDNA-binding protein and the identity of other DNA binding partners. This is speculated by the identity of TEF-1. The differentiation of P19 cells was determined by the method of stringency analysis. Now, degenerate-specific PCR is used to detect embryonic tumor cells.