炎症性サイトカインとそのレセプター遺伝子発現機序の解析とその制御

炎症细胞因子及其受体基因表达机制及调控分析

基本信息

批准号：
07672375
负责人：
笠原忠
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyoritsu University of Pharmacy
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

私共はIL-1やTNFによって誘導されるIL-8、MCAFなどの炎症性サイトカインがin vitroおよびin vivoでの役割を明らかにするため、本研究を行い、以下のような成果を得た。(1)種々の培養細胞におけるIL-8/MCP-1/JEおよびその遺伝子発現の解析を行った。とくに、ヒト好酸球で、IL-8産生を見たところ、Ca5の処理によって著名なIL-8産生が見られた(Miyamasuら、'95)。また、ヒトHL-60をレチノール酸およびDMSOによって好中球に分化させるとIL-8産生能が増大し、IL-8R発現の増加が見られた。さらに、IL-8遺伝子発現へのシグナル伝達を調べる目的で、NF-kBとのゲルシフト法を検討した(園田、論文投稿中)。(2)動脈硬化発症解析の一環として、ヒト血管内皮細胞と好中球・単球との接着におけるケモカインの関与を検討した。すなわち、血管内皮細胞は単球との接着によりIL-8およびMCP-1/JEを産生することをELISA、ノーザンブロットおよび免疫組織化学染色により明らかにした(Takahashiら、'95,'96,'97;Seinoら'95)。さらに脳腫瘍における炎症性サイトカイン発現について培養グリオーマ細胞株において検討を行った(Kasaharaら、投稿中)。(3)ヒトMCP-1/JE cDNAをBCMGSneoをミエローマ細胞株で発現させた。この細胞株をヌードマウスに移植し、in vivoにおける抗腫瘍増殖効果を検討したところ、腫瘍の周辺に単球・マクロファージが浸潤すると共に、単球の増加が観察された(Hoshinoら,'95)。また、IL-8RタイプA,Bを発現させ、これに対する特異抗体を作製した後、骨髄分化段階におけるIL-8レセプターの発現の解析を行った(Wangら,'96)。本研究について今後の継続課題としたい。

我们进行了这项研究，以阐明IL-1和TNF在体外和体内诱导的炎性细胞因子（例如IL-8和MCAF）的作用，并获得了以下结果。（1）对IL-8/MCP-1/JE的分析及其在各种培养细胞中的基因表达进行了分析。特别是，当在人嗜酸性粒细胞中观察到IL-8的产生时，通过用CA5处理观察到显着的IL-8产生（Miyamasu等，'95）。此外，通过视网膜酸和DMSO将人HL-60分化为中性粒细胞，提高了产生IL-8的能力，并观察到IL-8R表达增加。此外，我们研究了使用NF-KB的一种凝胶移位方法，以研究对IL-8基因表达的信号（Sonoda，目前正在提交论文）。（2）作为分析动脉硬化发作的一部分，我们研究了趋化因子参与人血管内皮细胞，中性粒细胞和单核细胞的粘附。也就是说，通过与单核细胞（ELISA，Northern斑点和免疫组织化学染色）粘附产生IL-8和MCP-1/JE的血管内皮细胞显示（Takahashi等人，95，'95，96，'96，'97； Seino等； Seino等，'95）。此外，在培养的神经胶质瘤细胞系中研究了脑肿瘤中炎症性细胞因子的表达（在Kasahara等人中发布）。（3）人MCP-1/JE cDNA在骨髓瘤细胞系中表达。该细胞系被植入裸鼠，并在体内研究了抗肿瘤生长效应，结果，单核细胞和巨噬细胞在肿瘤周围浸润，观察到单核细胞的增加（Hoshino等人，95）。此外，在表达A和B型IL-8R后，对它们制备了特异性抗体，分析了骨髓分化阶段IL-8受体的表达（Wang等，96）。我想让这项研究成为未来问题的延续。