权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

キメラ抗体を用いたバイオセンサーに関する蛋白質工学的研究

使用嵌合抗体的生物传感器的蛋白质工程研究

基本信息

批准号：
07750876
负责人：
上田宏
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)抗ニワトリ卵白リゾチーム(HEL)抗体HyHEL-10の可変領域FvのVH/VL、およびHEL間の相互作用を表面プラズモン共鳴バイオセンサーを用いて速度論的に解析した。この結果、VH断片とVL断片は抗原HELの存在下では安定な結合(Ka=10^9)をするが、抗原非存在下ではほとんど相互作用しない(Ka<<10^6)ことが判明した。またVHと抗原との結合解離速度は遅いが、VLと抗原とのそれは早いことから両者の結合の質の違いが示唆された。VH, VLの共存下では結合速度は早く、解離速度は遅くなることがわかり両者の協働作用の新しいモデルが考えられた(投稿中)。(2) VH断片をM13ファージのgene3蛋白質と融合発現させる事によりファージ表面に提示し、VH断片を固定化したマイクロプレートにファージと抗原を含むサンプルの混合液を入れて固相化されるファージの量を測定する、新原理の抗原濃度測定法(通称オープンサンドイッチ法)を開発した。抗原がないときのバックグラウンドは充分低く、10ng/ml程度のほぼ通常のELISA法に匹敵する感度が得られた。さらにgene3蛋白質の代わりに大腸菌アルカリフォスファターゼと融合発現させる事により、更に高感度に従来法のほぼ半分の時間で抗原濃度測定が可能なことも見いだした(投稿準備中)。(3) VH, VL断片をエリスロポエチン受容体の細胞外部位の一部と交換したキメラ受容体を作製し、proB細胞株BA/F3に導入して導入株がHELに対する応答性を示すかどうかを検討中である。

(1) the anti-HEL antibody HyHEL-10 can be used in the field of Fv VH/VL, HEL interaction, surface interaction and velocity analysis. The results showed that in the presence of VH fragment, VL fragment and antigen HEL, the combination of antigenic diazepam (Ka= 10 ^ 9) and antigenic interaction (Ka<< 10 ^ 6) in the absence of antigen were identified. The speed of dissociation of VH antigens combined with the speed of quarantine, the speed of quarantine, and the speed of quarantine, the speed of quarantine and the speed of quarantine. In the case of the coexistence of VH and VL, the combination speed of early and the speed of separation will be coordinated by the participants (in the contribution). (2) the fusion of VH fragments, M13 fragments, gene3 proteins, VH fragments, immobilized proteins, immobilized antigens, antigens, The antigen is low enough and the degree of 10ng/ml is low. Usually, the ELISA method matches the sensitivity of the antigen. The gene3 protein can be used to determine whether it is possible to use the method of half-minute time titration antigenic assay (in preparation for submission). (3) VH, VL fragments, the extracellular parts, the extracellular parts, the BA/F3 cells, the HEL cells, the cells.