ヒト抗体ファージ提示ライブラリの構築及びOS免疫測定原理に基づく診断用チップの開発

基于OS免疫分析原理的人抗体噬菌体展示库构建及诊断芯片开发

• 批准号: 09F09090
• 负责人: 上田 宏
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09090/
• 关键词: 生物・生体工学; 分析科学; 蛋白質

1)ファージライブラリからの甲状腺ホルモンの高感度検出系の構築血液中の甲状腺ホルモン(Thyroxine,T4)量は甲状腺疾患の診断マーカーとして重要であり、その簡便迅速な測定系の確立は最近の放射能不安解消の観点からも急務といえる。我々は最近,董研究員の開発したpDongシステムを用いて免疫マウスよりT4の高感度なOS-ELISAに適した抗体を選択することに成功した。これは,ハイブリドーマを介さずOS-IAに適した抗体を選択した初めての例である。さらに,ここで得られた抗体をマイクロ流路検出系に用いて,数マイクロリットルのサンプルより20分以内で血清中のT4濃度を測定することに成功した。2)高病原性トリインフルエンザウイルス抗体的開発高病原性(H5N1)トリインフルエンザウィルスは,特に迅速高感度な診断を要するターゲットである。そこで東京都臨床医学研究所の芝崎博士らと共同でOS-IAでこのウィルスを迅速高感度に検出するための抗体開発を行った。この際ウイルスの表面蛋白質ヘマグルチニン(H5-HA)ペプチドで免疫したマウス由来抗体ライブリを作製し,ここから,このペプチドに特異的に結合する抗体をパニングにより多数取得することができた。さらにこれらの抗体を用いて,HA蛋白質ペプチドの高感度なOS-ELISA実施にも成功した。さらに,GFP-HA融合蛋白質を発現するモデル感染細胞染色の実験で,これらの抗体が細胞内のHAとも結合することが確認された。現在実際の感染細胞でのウイルス粒子の検出をImmunoPCR法との組み合わせを含めて検討している。3)この他,抗原結合によりその酵素活性が促進される抗体酵素融合タンパク質の作製,多数の低分子認識抗体遺伝子のクローニングなど,多くの仕事に関わりそれぞれにつき成果をあげることができた。

1) High sensitivity detection system of thyroid gland in blood (Thyroxine,T4) is important for diagnosis of thyroid disease. Simple and rapid detection system is important for establishment of the most recent radiation disturbance. Recently, researcher Dong has successfully developed an anti-T4 antibody for high sensitivity OS-ELISA. This is the first time I've seen an OS-IA. In this paper, we successfully determined the concentration of T4 in serum within 20 minutes after the detection of antibody. 2)Development of highly pathogenic antibodies Highly pathogenic (H5N1), especially for rapid and highly sensitive diagnosis Dr. Shibazaki, Tokyo Institute of Clinical Medicine, jointly developed the OS-IA for rapid and highly sensitive detection. The surface protein H5-HA is derived from antibodies and is specifically bound to antibodies. In addition,HA protein was successfully purified by highly sensitive OS-ELISA. In addition,GFP-HA fusion protein was detected in infected cells, and the binding of antibodies to HA was confirmed. Now we can detect the virus particles in infected cells by ImmunoPCR and DNA sequencing. 3) In addition, the enzyme activity of antigen binding is promoted by antibody enzyme fusion, and most of the low molecular weight recognition antibody fragments are detected by enzyme fusion.

项目成果

A novel phage display system for open-sandwich immunoassay and antibody selection

用于开放夹心免疫分析和抗体选择的新型噬菌体展示系统

• 发表时间: 2010
• 作者: J.H.Dong;M.Ihara;H.Ueda
• 通讯作者: H.Ueda

蛍光免疫測定方法

荧光免疫分析法

• 发表时间: 2009

Open-Sandwich Enzyme Immunoassay for One-Step Noncompetitive Detection of Corticosteroid 11-Deoxycortisol

• DOI: 10.1021/ac900700a
• 发表时间: 2009-10-15
• 期刊: ANALYTICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 7.4
• 作者: Ihara, Masaki;Suzuki, Tatsuya;Ueda, Hiroshi
• 通讯作者: Ueda, Hiroshi

Micro open-sandwich ELISA to rapidly evaluate thyroid hormone concentration from serum samples.

• DOI: 10.4155/bio.10.125
• 发表时间: 2010-10
• 期刊: Bioanalysis
• 影响因子: 1.8
• 作者: K. N. Islam;M. Ihara;Jinhua Dong;Noriyuki Kasagi;Toshihiro Mori;H. Ueda

Activation of circularly permutated β-lactamase tethered to antibody domains by specific small molecules.

• DOI: 10.1021/bc1004125
• 发表时间: 2011-03
• 期刊: Bioconjugate chemistry
• 影响因子: 4.7
• 作者: M. Kojima;Hiroto Iwai;Jinhua Dong;Shean-Lee Lim;S. Ito;K. Okumura;M. Ihara;H. Ueda