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キメラ及び点変異体作成によるオピオイドδ受容体の同種脱感作機構の解析

通过构建嵌合体和点突变体分析阿片δ受体的同源脱敏机制

基本信息

批准号：
07770071
负责人：
宮前丈明
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アフリカツメガエル卵母細胞を用いた受容体発現実験において、本研究者はδ-オピオウド受容体と特定のGTP結合蛋白質(G蛋白)、とくにGi1の再構成実験をすでに確立してきたが、本研究においては、その同種脱感作の情報伝達機構を明らかにするとともに、受容体側に存在する機能領域を点変異体作成により決定した。実験には先に述べた卵母細胞を用い、δ-オピオイド受容体とGi1αサブユニットのRNAを同時注入し、数日後、0mV電位固定下に電流測定を行った。δ-オピオイドアゴニストはED50値30nMで外向きで、繰り返し適用によっても安定した電流応答を示したが、その100倍高濃度の適用によっては急速に脱感作を示した。詳しい薬理学的研究の結果、その脱感作機構にはδ-オピオイド受容体の活性化とそれに続くホスホリパーゼC活性化、プロテインキナーゼ活性化が関与することが明らかになった。δ-オピオイド受容体と同様の情報伝達を示すM2アセチルコリン受容体を同時に発現させた実験から、このδ-オピオイド受容体の脱感作機構は同異種であることが明らかになった。δ-オピオイド受容体には細胞内領域に数多くのセリン/スレオニン残基が存在し、これらはA-キナーゼやC-キナーゼの基質になりうることが明らかになっているが、これらのアミノ酸残基をアラニンに残基に点変異したそれぞれの受容体を作成し、同種脱感作を検討したところ、352番目のスレオニン残基をアラニン残基に変えたものに同種脱感作の消失が認められた。この位置は本7回膜貫通型受容体構造のC末端領域に相当することが明らかになった。

アフリカツメガエルOocyte をいたreceptor 発appear実験において, this researcher はδ-オピオウド acceptor and specific GTP-binding protein (G protein), とくにGi1のreconstructed 実験をすでにEstablishment of してきたが, においては of this study, そのhomogeneous desensitization work のinformation delivery organization を明It is determined that the recipient side exists and the functional area is modified and the variant is created.実験には first said べたoocyte をい, δ-オピオイド receptor とGi1α サブユThe ニットRNA was injected simultaneously, and a few days later, the current was measured at a fixed potential of 0 mV. δ-オピオイドアゴニストはED50夤30nMでoutgoingきで、粲り returnedしapplicableによっても安It can be applied to the current response of fixed current and 100 times high concentration, and it can be used for rapid desensitization. Detailed results of research on the science of science and the activation and activation of desensitization mechanisms and receptorsくホスホリパーゼC activation, プロテインキナーゼactivation and することが明らかになった. δ-オピオイドReceiverと同様のInformation伝达をshowすM2アセチルコリンReceiverをsimultaneouslyに発appearさせた実験から、このδ-オピオイド Receiver の desensitization mechanism は Same and different species であることが明らかになった. There are many residues in the intracellular domain of the δ-receptor, and there are many residues there. A-キナーゼやC-キナーゼの matrix になりうることが明らかになっているが、これらのアミノ acid Residual をアラニンにResidue にPoint変different したそれぞれのacceptor をmadeし、The same kind of desensitization made を検したところ, Chapter 352 of のスレオニンをアラニンに変えたものに Same kind of desensitization as のcognition められた. The position of the C-terminal area of this 7-layer membrane through-type receptor structure is quite clear.