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カルニチン欠乏による心肥大形成機序の解明-カルニチン投与に応答する遺伝子の単離を目指して-

阐明肉碱缺乏引起的心脏肥大的机制 - 旨在分离对肉碱给药有反应的基因 -

基本信息

批准号：
07770109
负责人：
堀内正久
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770109/
关键词：
カルニチン心肥大 JVS(Juvenile Visceral Steatosis)マウス Differential Display法

项目摘要

全身性カルニリン欠乏マウス(JVS:Juvenile Visceral Steatosisマウス)は報告者が中心になりその病態および病因解析が進められ、新たに確立された疾患モデルマウスである。本年度は、JVSマウスを利用し、JVSマウス肥大心室の遺伝子発現の特徴を明らかにするとともに、カルニチン投与で応答のみられる遺伝子を同定することを試みた。最近開発されたDifferential display法であるSokolov and Prockopの方法を一部改変して実験を行ない、その発現パターンを比較しJVSマウス,対照マウス、カルニチン治療JVSマウスでシグナル強度の異なる約500bpのバンドを検出した。既報に従いクローニング、シークエンスを行ない遺伝子配列を決定した。クローニングされたcDNAをプローブにし、Differential display法で分離、展開されたPCR productについてSouthern blot法を行ない、得られたcDNAがDifferential display上で変化を示したバンドに対応することを確認した。シークエンシングの結果、高いホモロジーを示す遺伝子はなく、未報告の遺伝子だった。通常のNorthern blotを施行したが、有意なシグナルを検出することはできなかった。現在、得られたシークエンスを基に、PCRプライマーを設定しquantitative RT-PCRを試み、mRNAの定量化を行なっている。この方法を用いることで、既知の遺伝子のみならず、JVSマウス心室で発現変化をしている未知の遺伝子を検出する可能性が示された。

Systemic karela deficiency syndrome (JVS: Juvenile Visceral Steatosisマウス)はreporterがcenterになりそのpathological diseaseおよびcause analysisが enterめられ,新たにEstablishmentされたDiseaseモデルマウスである. This year's use, JVS's use of hypertrophy of the ventricle, JVS's hypertrophy of the ventricle, the special features of the present yearかにするとともに, カルニチンinvest and で応 Answer のみられる伝子を同定することをtrial みた. Recently opened the Differential display methodであるSokolov and Prockop's methodをa modified version of the methodして実験を行ない、その発现パターンをComparisonしJVSマウス,対According to the masu, カルニチン treatment JVSマウスでシグナルstrengthのdifferentなるabout 500bpのバンドを検出した. It has been decided that the に従いクローニング, シークエンスを行ない缝子 will be arranged.クローニングされたcDNAをプローブにし、Differential display methodでSeparation and developmentされたPCR productについてSouthern The blot method has been performed, and the cDNA has been confirmed on the Differential display. The results of シークエンシングの, high いホモロジーをshows す缝子はなく, and unreported の缝子だった. Normally the Northern blot is performed and the intended use is done. Now, get the られたシークエンスをbaseに, the PCR プライマーを setting しquantitative RT-PCR をtestみ, and the mRNA quantification を行なっている.この法を用いることで, 知の缝子のみならず, JVSマウス心The room is now changing, the unknown remains, the possibility is revealed, and the possibility is revealed.