がん細胞におけるE-カドヘリン発現調節機構の解析

癌细胞E-cadherin表达调控机制分析

• 批准号: 07770140
• 负责人: 金井 弥栄
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770140/
• 关键词: E-カドヘリン; 細胞間接着; がん浸潤; 発現調節; DNAメチル化

E-カドヘリン発現調節機構を明らかにするために、E-カドヘリンプロモーターの決定を行った。はじめに、ヒトゲノムライブラリをヒトE-カドヘリンcDNAプローブを用いてスクリーニングし、陽性クローンを単離した。クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)アッセイにより、近位200bp程度の領域が上皮性細胞特異的プロモーター活性のcis regulatory elementを含んでいることを明らかにした。ヒトがん由来細胞株に-191プロモーター/CATコンストラクトをトランスフェクションしたところ、E-cadherin発現を欠く細胞株においてCAT活性の低下を認めた。そこで、プロモーター領域のCpGメチル化がE-カドヘリン発現低下の要因の一つとなる可能性を検討した。E-カドヘリンプロモーター領域はCpG richでmethylation sensitiveな制限酵素HpaIIの認識部位CCGGを多数含んでいた。そこでE-カドヘリン遺伝子5′領域のプローブを用いヒトがん由来細胞株におけるSouthern blotting analysisを行った。培養条件下で細胞間接着異常を示しE-カドヘリン発現を欠くヒトがん由来細胞株において、HpaII消化により、E-カドヘリンプロモーター領域のCpGメチル化を示唆するバンドが検出された。これらの細胞株をメチル化阻害剤である5-azacytidine10μMで15日間処理したところ、免疫細胞化学的に脱メチル化によるE-カドヘリン発現の回復が確認された。以上より、がん細胞において、プロモーター領域のCpGメチル化によりがん浸潤抑制遺伝子であるE-カドヘリンが不活化されることが明らかになった。

E - カ ド ヘ リ ン 発 now adjusting mechanism を Ming ら か に す る た め に, E - カ ド ヘ リ ン プ ロ モ ー タ ー の decided to line を っ た. は じ め に, ヒ ト ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ を ヒ ト E - カ ド ヘ リ ン cDNA プ ロ ー ブ を with い て ス ク リ ー ニ ン グ し, positive ク ロ ー ン を 単 from し た. ク ロ ラ ム フ ェ ニ コ ー ル ア セ チ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (CAT) ア ッ セ イ に よ り, degree of nearly 200 bp の field が epithelial cells specific プ ロ モ ー タ ー active の cis regulatory element contains を ん で い る こ と を Ming ら か に し た. ヒ ト が ん origin cell lines に - 191 プ ロ モ ー タ ー / CAT コ ン ス ト ラ ク ト を ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た と こ ろ, E cadherin 発 を now owe く cell lines に お い て CAT の is low and を recognize め た. そ こ で, プ ロ モ ー タ ー field の CpG メ チ ル change が E - カ ド ヘ リ ン 発 now low の by の a つ と な る possibility を beg し 検 た. E-カドヘリ <s:1> プロモ タ タ タ タ field <s:1> CpG richでmethylation sensitiveな limiting enzyme HpaII <s:1> recognition site CCGGを most contain んで た た た. そ こ で E - カ ド ヘ リ ン heritage 伝 son 5 'field の プ ロ ー ブ を with い ヒ ト が ん origin cell lines に お け る Southern blotting analysis line を っ た. Cultivate indirect で cells under the condition of the abnormal を し in E - カ ド ヘ リ ン 発 を now owe く ヒ ト が ん origin cell lines に お い て, HpaII digestion に よ り, E - カ ド ヘ リ ン プ ロ モ ー タ ー field の CpG メ チ ル change を in stopping す る バ ン ド が 検 out さ れ た. こ れ ら の cell lines を メ チ ル chemical resistance against tonic で あ る 5-15 day azacytidine10 mu M で 処 Richard し た と こ ろ, immunocytochemistry に メ off チ ル change に よ る E - カ ド ヘ リ ン 発 is の RSVP with が さ れ た. Above よ り, が ん cells に お い て, プ ロ モ ー タ ー field の CpG メ チ ル change に よ り が ん infiltrating inhibit heritage 伝 son で あ る E - カ ド ヘ リ ン が inactive さ れ る こ と が Ming ら か に な っ た.