ヒト造血幹細胞に発現する新規サイトカイン受容体の探索

寻找人类造血干细胞中表达的新型细胞因子受体

• 批准号: 07857075
• 负责人: 徳元 康人
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857075/
• 关键词: 造血幹細胞; サイトカイン受容体; PCR; CD34; WSXWSモチーフ

ヒト骨髄細胞をPhycoerythrinでラベルしたCD34抗体とFITCでラベルしたCD33抗体で二重染色し、FACSによりCD34陽性CD33陰性分画の細胞を分散した.mRNAを抽出後、サイトカイン受容体に特異的なモチーフであるWSXWSとPXPのアミノ酸に対応する塩基配列を持つPCRプライマーでRT-PCRを行った.RT-PCRは、あらかじめ最適化してあったヒト巨核芽球細胞株であるUT-7由来のmRNAでエリスロポエチン受容体cDNAが53倍に濃縮できる条件で行った.RT-PCR後に得られた遺伝子増幅産物をサブクローニングしてプラスミッドライブラリーを作製した.この中から500個のコロニーを無作為に選びDNA塩基配列を決定した.244コロニーは79種類の既知の遺伝子で、このなかにはGM-CSF受容体とG-CSF受容体が含まれていた.一方、他の256コロニーには198種類の未知の遺伝子が含まれていた.この中に新規のサイトカイン受容体が含まれているかどうかをさらに検討するために、DNA塩基配列をもとにhydrophobicityの解析をおこなった.プライマーの設計に使用した二つのサイトカイン受容体のモチーフの間には膜貫通部が含まれていると予想されることから、hydrophobicなアミノ酸配列をもつクローンを選別した.その結果、少なくとも3種類のクローンが強いhydrophobicな領域を含んでいることが明らかになった.現在、これらのクローンについてさらに詳しい解析を行っている.

ヒ ト bone marrow cells を Phycoerythrin で ラ ベ ル し た CD34 antibody と FITC で ラ ベ ル し た CD33 antibody で double staining し, both FACS に よ り CD34 positive CD33 negative points draw の cells scattered を し た. MRNA を after extraction, サ イ ト カ イ ン by let body に specific な モ チ ー フ で あ る WSXW S と PXP の ア ミ ノ acid に 応 seaborne す る salt base with column を hold つ PCR プ ラ イ マ ー で rt-pcr を line っ た. Rt-pcr は, あ ら か じ め optimization し て あ っ た ヒ ト megakaryocytes gemmule cell lines で あ る UT - 7 origin の mRNA で エ リ ス ロ ポ エ チ ン by let body cDNA が 53 times に enrichment で き る line conditions で っ た. R After T - PCR に ら れ た heritage 伝 child rights product picture を サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し て プ ラ ス ミ ッ ド ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. こ の in か ら 500 の コ ロ ニ ー を without salt as に choose び DNA base with column を decided し た. 244 コ ロ ニ ー は 79 kinds の already know の heritage 伝 で, こ の な か に は gm-csf と G - let body The CSF recipient が contains まれて た た た. Side, his 256 コ の ロ ニ ー に は 198 unknown species の の heritage 伝 son が containing ま れ て い た. こ の に in new rules の サ イ ト カ イ ン by let body contains が ま れ て い る か ど う か を さ ら に beg す 検 る た め に, DNA salt base with column を も と に hydrophobicity の parsing を お こ な っ た. プ ラ イ マ ー に use し の design た two つ の サ イ ト カ イ ン by let body の モ チ ー フ の between に は transmembrane department contains が ま れ て い る と to think さ れ る こ と か ら, hydrophobic な ア ミ ノ acid with column を も つ ク ロ ー ン を choose don't し た. そ の results, less な く と も 3 kinds の ク ロ ー ン が strong い hydrophobic を な field containing ん で い る こ と が Ming Youdaoplaceholder0 になった. Now, る れら れら ロ ロ に に てさらに てさらに てさらに detailed <s:1> analysis を line って る る る.