急性リンパ性白血病の癌原遺伝子Lhx4の機能解析

原癌基因Lhx4在急性淋巴细胞白血病中的功能分析

• 批准号: 14570998
• 负责人: 川又 紀彦
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570998/
• 关键词: がん遺伝子; アポトーシス; 転写因子; DNAマイクロアレー

急性リンパ性白血病では時にt(1;14)(q25;q32)という染色体異常を認めることがある。我々はすでにこの異常が1q25上のLhx4遺伝子と14q32上の免疫グロブリン重鎖遺伝子が遺伝子再構成し、Lhx4遺伝子が過剰発現することを報告した。Lhx4遺伝子の過剰発現が細胞の癌化と関係していることが予測された。Lhx4蛋白はその構造から転写因子であると予測され、その下流の遺伝子の発現を増加させると予測された。Lhx4蛋白によって発現が制御される下流遺伝子群の中に癌化と密接に関る遺伝子群が含まれると予測された。そこで、Lhx4遺伝子を発現していない肺がん細胞株A549にLhx4遺伝子を一過性に強制発現させたものとempty vectorを遺伝子導入したものをDNAマイクロアレイを用いて発現している遺伝子群の比較を行った。また、同様にLhx4安定発現株とコントロール株を樹立し、それいぞれに付いてDNAマイクロアレーを用いて発現している遺伝子群の比較を行った。一過性発現実験および安定発現株実験において共にLhx4を導入した細胞株ではアポトーシス抑制作用のある蛋白をコードする遺伝子群(IAP: inhibitor of apoptosis 1,2など)が比較細胞に比べて過剰に発現していることが予測させた。その発現レベルの差はReal-time PCR法により更に確認された。この結果を元に、Lhx4安定発現株とコントロール株を用いて紫外線、放射線、各種抗がん剤に対する感受性(アポトーシスの誘導率)を比較した。しかし、それぞれの株で感受性(アポトーシス誘導率)に差は認められなかった。そこで、これらのLhx4下流遺伝子群がmRNAレベルでは差を認めるが、たんぱく質レベルでの発現量に差があるかどうかウエスタンブロット法で検討した。その、結果各細胞株間でIAP1,IAP2蛋白の発現量に差は認められなかった。この結果は使用した肺がん細胞株A549では元来IAP1,IAP2の蛋白量が何らかの機序により高発現しており、Lhx4遺伝子の導入によるmRNA発現量の増加は蛋白レベルの増加に結びつかないことによると考えられた。現在、細胞株を変えて更にLhx4遺伝子導入による細胞のアポトーシス誘導能への影響を検討中である。更に、IAP1,IAP2遺伝子のプロモーター領域をクローニング中であり、今後これらの領域の中でどの領域がLhx4蛋白によって認識されるかを欠損mutantを作成して検討する計画である。

Acute leukaemia is characterized by t(1;14)(q25;q32) and chromosomal abnormalities. We report this anomaly to Lhx4 on 1q25 and to Lhx4 on 14q32. Lhx4 gene expression is related to cell carcinogenesis. Lhx4 protein structure change factor is predicted, and downstream protein change factor is predicted. Lhx4 protein expression is controlled by down-stream gene expression, and the down-stream gene expression is controlled by down-stream gene expression. The expression of Lhx4 gene in cell line A549 was compared with that in empty vector. A comparison of Lhx4 stable development strains and their genetic subgroups was conducted. The transient expression and stable expression of Lhx4 were detected in the cell lines introduced with the inhibitor of apoptosis 1,2 (IAP). The difference between the two was confirmed by Real-time PCR. The results showed that Lhx4 had higher sensitivity to ultraviolet rays, radiation and various kinds of anti-inflammatory agents. The sensitivity of the plant is different from that of the plant. The expression level of mRNA in Lhx4 was determined by the method of expression. The expression of IAP1 and IAP2 proteins varied among cell lines. The results showed that the protein levels of IAP1 and IAP2 increased with the use of A549 cell line, and the mRNA levels increased with the introduction of Lhx4 gene. Now, cell lines are being transformed into Lhx4 genes to investigate the effects of cell differentiation on induction of protein. In addition, IAP1,IAP2 gene expression in the domain of Lhx4 protein in the future, the domain of Lhx4 protein in the domain of Lhx4 protein in the future, the domain of Lhx4 protein in the domain of Lhx4 protein in the domain of Lhx4 protein.