平滑筋ミオシン結合蛋白質のミオシン線維形成と安定化における機能の解析

平滑肌肌球蛋白结合蛋白在肌球蛋白原纤维形成和稳定中的功能分析

• 批准号: 08670135
• 负责人: 岡垣 壮
• 金额: --
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670135/
• 关键词: 平滑筋; ミオシン; リン酸化; 筋康線維

ニワトリ砂嚢平滑筋の粗ミオシン抽出液よりミオシン重合を促進する蛋白質の精製をおこなった。非リン酸化ミオシンと混合してミオシン線維を形成する活性を指標に精製をおこない、分子量38k、32k、31k、28kDaの4種類の蛋白質を単離した。これらの蛋白質はそれぞれミオシンの重合を促進する活性があったが、本年度は主として38k蛋白質の性質を解析した。非リン酸ミオシンに精製38k蛋白質を加えると、ミオシン線維が形成された。電子顕微鏡、光学顕微鏡で形成されたミオシン線維の形状を観察するリン酸化ミオシンの場合とほぼ同程度の太さの繊維を形成した。遠心法でミオシン線維を沈殿させて重合の定量をほおこなった結果、この蛋白質により非リン酸化ミオシンの重合はリン酸化ミオシンと同程度のレベルまで上昇した。ミオシン重合の促進はミオシンに対しモル比で3倍程度の濃度で飽和し、そのストイキオメトリーは1:1であった。38k蛋白質はリン酸化ミオシンに対しても、非リン酸化ミオシンと同程度の結合能を示した。従って生体内では収縮・弛緩の時期にかかわらず常にミオシン線維と結合していると考えられる。ところでこの蛋白質の部分アミノ酸配列を決定した結果、ヒト培養細胞やほ乳類の種々の組織から得られているp32蛋白質ときわめて高いホモロジーを持つことがわかった。そこでヒト培養細胞から得られたp32のcDNAを大腸菌で発現させ精製した。大腸菌で発現したp32はミオシンと混合すると38k蛋白質と同様ミオシンの重合を促進した。さらにこれをウサギに免疫し抗体を作製した。ニワトリ38k蛋白質はこの抗体と反応した。以上の結果より38kはニワトリのp32であると考えられる。現在この蛋白質のクローニングをおこなっているところである。

The protein purification process is promoted by the combination of protein and protein. 4 kinds of proteins with molecular weights of 38k, 32k, 31k and 28kDa were separated. This year's analysis of the properties of the 38k protein Non-acid-rich 38k protein is added to the protein. Electronic micromirrors and optical micromirrors are used to form the shape of the line and to observe the shape of the line and to form the line to the same extent. The distance between the center and the center of the line is different. The coincidence of the quantitative results and the protein is different. The coincidence of the protein is different. The same degree of coincidence increases. The ratio of the concentration to the saturation ratio is 3 times, and the ratio to the saturation ratio is 1:1. 38k protein protein In the body, there is a period of contraction and relaxation. Some of the proteins in this study were identified by acid sequencing. The results showed that p32 protein was found in cultured cells and breast tissues. P32 cDNA was isolated from cultured cells and purified from Escherichia coli. E. coli production p32 protein isoforms and combinations This is the first time I've ever seen an antibody. 38k protein is the anti-protein. The above results show that the 38k is not the same as the p32. Now, the protein is very important.

项目成果

K.Kohama et al: "Myosin light chain kinase : an actin-binding protein that regulates an ATP-dependent interaction with myosin" Trends in Pharmacological Sciences. 17. 284-287 (1996)

K.Kohama 等人：“肌球蛋白轻链激酶：一种肌动蛋白结合蛋白，调节 ATP 依赖性与肌球蛋白的相互作用”药理学科学趋势。