ホスホリパーゼA2活性調節機構とそのプロテインキナーゼC活性化に果たす役割の研究

磷脂酶A2活性调控机制及其在蛋白激酶C激活中的作用研究

• 批准号: 08670176
• 负责人: 辻下 洋介
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670176/
• 关键词: ホスホリパーゼA_2; プロテインキナーゼC; 不飽和脂肪酸; リゾリン脂質; ホスホリパーゼA_1; リゾホスホリパーゼA; 脂質メディエーター; 細胞内情報伝達

(A)無細胞系(Cell lysate)におけるアラキドン酸非選択的PLA_2の活性調節機構の検討を行った。(a)ヒト白血病細胞株U-937細胞及びHL-60細胞をさまざまな条件で破砕し無細胞系を作成し、エレクトロポレーション法により得られた細胞レベルにおけるPLA_2活性調節機構に関する知見が無細胞系において再現できるか否かを検討した。その結果、無細胞系においては同様の活性調節機構はみられず、相対的にPLA_2活性が上昇していることが観察された。(a)アラキドン酸非選択的PLA_2の活性を単一蛋白質として分離するために必要な知見を得るために細胞レベルで観察されたアラキドン酸非選択的PLA_2活性が細胞内のどのコンパートメントに存在するかを検討した。その結果、基質特異性、活性化因子(PH,Ca^<2+>依存性)などが酵素学的に異なるPLA_2の活性が核、ミトコンドリア、細胞質、細胞膜画分それぞれに見られた。それらのうちエレクトロポレーション法により得られた細胞レベルにおけるPLA_2活性と酵素学的に類似するものは、細胞質、細胞膜画分に存在した。(B)アラキドン酸非選択的PLA_2をヒト白血病細胞株U-937細胞、HL-60細胞、及びラット脳より精製を行っているが、現在のところそれぞれ精製倍率1000倍から100倍の部分精製となっている。酵素学的にはホスホリパーゼA_2、ホスホリパーゼA_1、リゾホスホリパーゼA活性を有しており、いずれもCa^<2+>を要求しなかった。PKC活性化に果たす役割についてはチロジンリン酸化されたPKCδとされていないPKCδを用いて検討した。PKCδは試験管内ではその活性が不飽和脂肪酸により抑制されることがわっかっていたが、チロジンリン酸化はその抑制作用に影響しないことがわかった。

(A) no Cell line (Cell lysate) に お け る ア ラ キ ド ン acid non sentaku PLA_2 の activity regulating mechanism の 検 line for を っ た. (a) ヒ ト leukemia cell line U - 937 cells and び - HL 60 cells を さ ま ざ ま な conditions で broken 砕 し no cell line を し, consummate エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン method に よ り have ら れ た cells レ ベ ル に お け る PLA_2 activity regulating mechanism に masato す る knowledge が no cell line に お い て reappearance で き る か no か を beg し 検 た. そ の results, no cell line に お い て は with others の activity regulating mechanism は み ら れ ず, phase of seaborne に PLA_2 activity が rise し て い る こ と が 観 examine さ れ た. (a) ア ラ キ ド ン acid non sentaku PLA_2 activity の を 単 a protein と し て separation す る た め に な necessary knowledge を have る た め に cells レ ベ ル で 観 examine さ れ た ア ラ キ ド ン acid non sentaku が PLA_2 activity in cells の ど の コ ン パ ー ト メ ン ト に exist す る か を beg し 検 た. そ の results, substrate specificity, and active factors (PH, Ca ^ 2 + > < dependency) な ど に が enzymes learn different な る PLA_2 の が nuclear activity and ミ ト コ ン ド リ ア, cytoplasm and cell membrane picture そ れ ぞ れ に see ら れ た. そ れ ら の う ち エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン method に よ り have ら れ た cells レ ベ ル に お け る PLA_2 activity と に similar enzymes learn す る も の は, cytoplasm and cell membrane existence に し た. (B) ア ラ キ ド ン acid non sentaku PLA_2 を ヒ ト leukemia cell line U - 937 cells, the HL 60 cells, and び ラ ッ ト 脳 よ り refined を line っ て い る が, now の と こ ろ そ れ ぞ れ refining ratio 1000 times か ら 100 times の part refined と な っ て い る. Enzymes studied に は ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2, ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_1, リ ゾ ホ ス ホ リ パ ー ゼ active を A has し て お り, い ず れ も Ca ^ < 2 + > を requirements し な か っ た. PKC activation に fruit た す "cut に つ い て は チ ロ ジ ン リ ン acidification さ れ た PKC delta と さ れ て い な い PKC delta を with い て beg し 検 た. PKC delta は test tube で は そ の active が unsaturated fatty acid に よ り inhibit さ れ る こ と が わ っ か っ て い た が, チ ロ ジ ン リ ン acidification は そ の inhibition に influence し な い こ と が わ か っ た.

项目成果

Kadotani,M.,et.al.: "Tyrosine phosphorylation of protein kinase C-δ and its implication for signal transduction." J.Biochemistry. (in press). (1997)

Kadotani, M., et.al.：“蛋白激酶 C-δ 的酪氨酸磷酸化及其对信号转导的影响。”（出版中）。

Asaoka,Y.,Tsujishita,Y.,and Nishizuka,Y.: "Handbook of Lipid Research,Volume 8 : Lipid Second Messengers" Plenum Press,New York, 16 (1996)

Asaoka,Y.、Tsujishita,Y. 和 Nishizuka,Y.：“脂质研究手册，第 8 卷：脂质第二信使” Plenum Press，纽约，16 (1996)