赤痢菌の細胞侵入性遺伝子発現調節機構-InvEと相互作用をする因子の分離・解析

志贺氏菌细胞侵袭基因表达的调控——与 InvE 相互作用的因子的分离和分析

• 批准号: 08670330
• 负责人: 渡辺 治雄
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670330/
• 关键词: 病原性遺伝子; 赤痢菌; 発現調節; invE; virF

赤痢菌は腸管上皮細胞に侵入することが,病原性惹起の第一ステップとなる。細胞侵入性に必要な分泌性蛋白質IpaBCDは,複合体を形成後宿主細胞に機能し,宿主細胞のアクチン等の細胞骨格性物質の活性化つまりファゴサイトーシス様の形態変化を引き起こすことにより宿主細胞内に侵入する。細胞侵入性誘導性物質IpaBCD遺伝子は2つのアクティベイタ-VirF,InvEにより正に制御されている。InvEはipaBCDオペロンに機能し,その発現を転写レベルで活性化するがその詳細は明らかでない。そこで,精製したInvE蛋白質を用いてipaBCDオペロンを含む細胞侵入性遺伝子群に対してSouth-Western Blottingを行ったところ,DNA binding能を示したが,プロモタ-領域に特異的結合性を示さなかった。塩基配列から想定されるInvEのアミノ酸配列によると,中央部位にhelix-turn-helix(HTH)構造,およびleucine zipper構造,そしてC-末にParB蛋白質のDNA結合活性をもつ部位と類似性をもつ部位が存在する。その構造から,InvEはleucine zipperを介して他の蛋白とdimerを形成しその後,特異的DNA結合能を持つようになることが想定される。IPTGによるInvE多量発現系において,IpaBCDの産生を調べると,InvE量が増大すると逆にIpaBCD産生が減少した。leicine zipper構造をもつ部位を多量産生させても同様にIpaBCDの産生が減少した。この結果は,InvEのleucine zipper部位と反応する物質が存在することを支持する結果と考えられる。

Dysentery bacteria に intestinal epithelial cells に invade する とが とが pathogenic causes the first ステップとなる. Cell invasive に necessary な secretory protein IpaBCD は, complex を host cell に し function, after the formation of the host cell の ア ク チ ン の cell skeleton material such as の activeness つ ま り フ ァ ゴ サ イ ト ー シ ス others の morphology variations を lead き up こ す こ と に よ り に within the host cell invasion す る. Cell invasive induced material IpaBCD posthumous son 伝 は 2 つ の ア ク テ ィ ベ イ タ - VirF InvE に よ り is に suppression さ れ て い る. Function of InvE は ipaBCD オ ペ ロ ン に し, そ の 発 を now planning to write レ ベ ル で activeness す る が そ の detailed は Ming ら か で な い. そ こ で, refined し た InvE protein を い て ipaBCD オ ペ ロ ン を contain traces of む cell invasive 伝 subgroup に し seaborne て South - Western Blotting を line っ た と こ ろ, DNA binding can を shown し た が, プ ロ モ に specific associative を タ - field in さ な か っ た. Salt base with column か ら scenarios さ れ る InvE の ア ミ ノ acid with column に よ る と, central part に helix - turn - helix (HTH) structure, お よ び leucine zipper structure, そ し て C - at the end of the に ParB protein の DNA binding activity を も つ parts と similarity を も が つ parts exist す る. そ の tectonic か ら, InvE は leucine zipper を interface し て he の protein と dimer を form し そ の, specific DNA binding energy を hold つ よ う に な る こ と が scenarios さ れ る. IPTG に よ る InvE 発 now is abundant に お い て, IpaBCD の produce を adjustable べ る と, が raised large amount of InvE す る と inverse に IpaBCD が decrease し た. In the leicine zipper structure, the を <e:1> を part of the を generates an excessive amount of させて <e:1>. Similarly, the にIpaBCD <s:1> generates a が reduction in た た. は こ の results, InvE の leucine zipper parts と anti 応 す る が matter す る こ と を support す る results と exam え ら れ る.