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立体構造と蛋白工学的解析に基づくグルタチオン・トランスフェラーゼの機能発現機構

基于三维结构和蛋白质工程分析的谷胱甘肽转移酶功能表达机制

基本信息

批准号：
08672536
负责人：
井上英史
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.大腸菌由来グルタチオントランスフェラーゼ(GST)の立体構造の解明大腸菌GSTとその阻害剤グルタチオンスルフォネートとの複合体の立体構造をX線結晶解析により明らかにした.それにより,次のような重要な知見が得られた.大腸菌GSTは,哺乳類のα,μ,πクラスGSTや昆虫由来のσクラスGST,植物由来のGSTなど他の細胞質型GSTと基本的に相同な立体構造を持つことが明らかになった.しかしながら,活性部位の詳細な構造には重要な相違が見られた.すなわち,α,μ,π,σクラスGSTで触媒残基ではチロシン残基,昆虫由来GSTではセリン残基の側鎖が触媒基として機能していると考えられている.大腸菌GSTではTyr5とSer11が,そのチロシン,セリン残基に一次構造的に相当すると考えられるにもかかわらず,そのいずれも側鎖は活性部位に位置していなかった.このことはGSTファミリーが,触媒機構に関与する残基の相違により少なくとも3つのグループに分かれることを示唆する.2.πクラスGSTの基質特異性に関与する領域の解析ヒトとラットに由来するπクラスGSTの1-クロロ-2,4-ジニトロベンゼンに対する活性の相違を利用して,キメラ酵素及び部位特異的変異体を作製,解析することにより基質特異性に関与する構造の検索を行った.またコンピューターモデリングを用いて実験結果と合わせて検討した.その結果,GSH結合部異を構成するGSTのN端側ドメインと,C端側ドメインのヘリックスD及びFによって形成される空間がCDNBの認識に関わることが示唆された.

1. The origin of coliform bacteria and the three-dimensional structure of coliform bacteria GST are explainedとその牤グルタチオンスルフォネートとのcomplex のthree-dimensional structure をX-ray crystal analysis により明らかにした.それにより,时のようなimportant knowledge and knowledge がget られた. coliform GSTは, mammal のα,μ , πクラスGSTやInsect originのσクラスGST,Plant originのGSTなどhisのcytoplasmic GSTとThe basic three-dimensional structure is the same as the three-dimensional structure of the active part, and the detailed structure of the active part is It is important to make the same thing as the non-conforming material.ン residue, origin of insect .Escherichia coli GST Tyr5 and Ser11 are equivalent to the primary structure of the residues of Tyr5 and Ser11.すると卡えられるにもかかわらず,そのいずれもside lockはactive siteにpositionしていなかった.このことはGST ファミリーが,catalyst mechanism に关 and する residual base により小なくとも3つのグルー2. πクラスGST matrix specificity and analysis in the domainとラットにするπクラスGSTの1-クロロ-2,4-ジニトロベンゼンに対するACTIVEのIt is produced using して, キメラ enzyme and び site-specific allogene, and analyzes the することにより matrix specificityに关与するstructuringの検SOを行った.またコピューターモデリングを用いて実験RESULTSと合わせてThe result of the research is that the GSH binding part is different and the N-end side of the GST is formed, and the C-end side is the same.のヘリックスD and びFによって form されるspace がCDNB のcognition に关わることが说憆された.