胃粘膜中の好中球遊走抑制因子の精製とその一次構造の解析

胃粘膜中性粒细胞迁移抑制因子的纯化及其一级结构分析

• 批准号: 08672542
• 负责人: 岡部 進
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672542/
• 关键词: 胃粘膜; 好中球; 遊走

著者らが見出した正常ラットの胃粘膜に存在する好中球の遊走を抑制する活性の単離・精製を試みた。ラット好中球を別に採取し、遊走刺激はfMLPを用いた。ウイスター系雄性ラットから胃粘膜抽出液を作製し、小麦胚芽レクチンセファロースカラムにかけたところ、遊走抑制活性はこの樹脂に吸着したことから、糖鎖を有するものと示唆された。次に陰イオン交換Mono-Qカラムにかけたところ、本活性はひとつのピークを示し溶出された。続いてゲル濾過スーパーロース12カラムにかけたところ、同様にひとつのピークを示し溶出され、分子量は約65,000であった。このゲル濾過の画分の蛋白質をSDS電気泳動で解析したところ、分子量60,000付近にバンドが確認され、活性の強度とバンドの強度との間に相関性が認められた。この結果から、遊走抑制因子は単量体であることが判明した。現在までに報告のある好中球の遊走を抑制する因子と比較すると明らかに異なり、新規な蛋白質であると考えられた。しかしながら、いくつかの不純物が混在していたので、さらに精製を進めるためにSDSゲルからの抽出を検討した。遊走抑制活性はSDS処理すると失活したが、透析を繰り返すことにより活性の回復がみられた。そこで、SDSゲルから効率よく抽出するためにミニプレップセルを利用した。しかしながら、現在の条件設定では蛋白質の回収率があまり良好ではなく、ペプチド配列の決定を行いうる量を得ることに問題がある。今後、条件を検討し、かつより大量の胃粘膜抽出液からの精製を行い、この遊走抑制因子の構造を決定していく予定である。

The author has found out that the presence of normal gastric mucosa, the migration of good balls, and the inhibition of activity of the gastric mucosa have been tested. You can hit the ball well if you don't want to hit it, and you can use it if you want to hit the ball easily. Yakuza male ラットから gastric mucosal extract liquid をし, wheat germ レクチンセファロースカラムにかけたところ, migration inhibitory activity はこのresin にsorbing したことから, sugar lock を有するものとshows soso された. Sub-Yin イオン exchanges Mono-Q カラムにかけたところ, and the active はひとつのピークをshows し dissolves された.続いてゲル filtered スーパーロース12カラムにかけたところ、同様にThe ひとつのピークをshows that the solution is dissolved, and the molecular weight is about 65,000であった.このゲルfiltered のpainted のprotein をSDS electrophoresis でanalyzed したところ, molecular weight 60,00 0 Pay close to the confirmation of the activity, the strength of the activity and the correlation between the activities. The result and the migration inhibitory factor were determined. It is now reported that the good hit ball's wandering inhibitory factor is compared with the new standard protein and the new protein is tested.しかしながら、いくつかのImpurities が are mixed in していたので、さらに精品を入めるためにSDS ゲルからのdraw out を検问した. The migration inhibitory activity is inactivated by SDS treatment, and the activity of dialysis is restored by dialysis.そこで, SDS ゲルからefficiency よくdraw out するためにミニプレップセルをutilization した.しかしながら、The current condition setting is ではThe protein recovery rate is good ではなく、ペプチド配arrayのdeterminationを行いうるquantityをgetることにquestionがある. From now on, the conditions are determined, and the structure of the migration inhibitory factor and the structure of the gastric mucosal aspirate in large quantities are determined.