好中球遊走機能分子TM316の蛋白一次構造の決定と機能ドメインの検索

中性粒细胞迁移功能分子TM316蛋白质初级结构的测定及功能域的寻找

• 批准号: 04670284
• 负责人: 山本 一彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670284/
• 关键词: 好中球; 遊走機能分子; cDNA

好中球の遊走機能を抑制するモノクローナル抗体であるTM316抗体が認識するcDNAをクローニングし、そのアミノ酸の一次構造を明らかにし、さらに機能ドメインを検索するのが本研究の目的であった。計画調書に記載した如く、昨年度に発現ベクターで作成した好中球cDNAライブラリーとTM316抗体を用いてクローニングした約1400塩基対のcDNAを用いて、本年度はさらに長い約1700塩基対のcDNAをクローニングしたが、最終的にこれらのクローンはTM316分子をコードする遺伝子であることを特定することは出来なかった。すなわち、このcDNAを用いたノーザンブロットの解析では、シグナルは約2000塩基のところに検出され、さらに好中球だけでなく、リンパ球等にも検出されることが判明したからである。TM316抗体は好中球特異的に約150kDaの分子と反応することから、おそらくこのcDNAが規定する蛋白ではないと考えられた。そこで今年度はさらに別のアプローチとして、TM316抗体を用いて、好中球膜分画から免疫沈降法により精製した分子のアミノ酸配列の決定を行なった。まずこの精製分子を直接シークエンサーにて分析したがシグナルが検出されず、N末端がブロックされていると考えられた。そこでV8プロテアーゼ、リシルエンドペプチダーゼなどを用いて精製分子を部分分解し、その分解された断端のN末端をシークエンスすることにした。現在V8プロテアーゼによる2つの断端のN末端8アミノ酸残基及び6アミノ酸残基の配列を決定することが出来ている。コンピューターによる検索では既知の配列ではないことも判明している。今後この配列をプローブとしてcDNAをクローニングしていく予定である。

Inhibition of the swimming function of a good ballグし、そのアミノ acidのprimary structure を明らかにし、さらにFUNCTIONAL ドメインを検SO するのがThe purpose of this study is であった. The plan is recorded in the book, and the results of the previous year are as follows: the cDNA file of the good shot is madeとTM316 antibody is used, and it is used for this year. The degree of length is about 1700. The base of cDNA is をクローニングしたが, and the final にこれらのクローンはTM316 molecule をコードする伝子であることをspecific することは出なかった.すなわち, このcDNAをUsing いたノーザンブロットのanalysis では, シグナルは approximately 2000 のところに検出され, さらに好杀だけでなく, リンパball, etc. にも検出されることが开奖したからである. The TM316 antibody is an approximately 150 kDa molecule that is specific to the target and is a molecule that reacts with the protein, cDNA, and protein.そこでThis year's はさらに比のアプローチとして, TM316 antibody を用いて, 好中Spherical membrane separation and immunoprecipitation are used to refine the molecular structure and determine the acid alignment.まずこのRefined MoleculeをDirect Analysisルが検出されず, N-terminal がブロックされていると考えられた.そこでV8プロテアーゼ、リシルエンドペプチダーゼなどをいて refined moleculesをPartial decomposition し, その decomposition されたbreaking end のN end をシークエンスすることにした. Now the arrangement of V8 プロテアーゼによる2 つのN-terminal 8 アミノ acid residues and び6 アミノ acid residues has been decided and the することが comes out.コンピューターによる検SO では already known のmatch arrangement ではないことも clarified している. From now on, it is planned to arrange the cDNA sequence of the cDNA sequence.