バイオターゲッティング素子としての抗体断片の高効率生産と構造機能解析
作为生物靶向元件的抗体片段的高效生产和结构功能分析
基本信息
- 批准号:10145248
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
B.brevis系において抗ヒトウロキナーゼIgG1Fabの生産量は100mg/lであり、単純なフラスコ培養の結果としては、他の系における生産量より高い。しかし、この量はB.brevisにおける原核生物由来のタンパク質の生産量と比較すると少ない。この原因を明らかにするため、抗体断片とBacillus lichenniformisのα-アミラーゼとの融合遺伝子を作製して、その発現について解析した。このアミラーゼはB.brevis系において大量(3.5g/l)に生産されることから、転写、翻訳、分泌過程における障害が殆どなく、分泌後のタンパク質としての安定性も非常に高いと考えられる。先ず抗ヒトウロキナーゼIgG1FabのL鎖遺伝子との融合遺伝子を作製して発現させたところ、α-アミラーゼ遺伝子を単独で発現させた場合とほぼ同量の融合遺伝子産物が培地中へ分泌された。この結果は抗ヒトウロキナーゼIgG1FabのL鎖にはB.brevisにおける転写、翻訳、分泌過程を阻害するアミノ酸配列が存在しないことを示している。現在H鎖のアミノ酸配列について同様な解析を行いつつある。19、32、43、53、および63個のアミノ酸からなるリンカーペプチドにより連結された抗ヒトウロキナーゼIgG1単鎖Fabの発現分泌ベクターを作製し、B.brevisに導入した。その結果、43個のアミノ酸からなるリンカーペプチドを用いた場合に最高生産量(10mg/l)が観察された。一方、抗ヒト白血球抗原IgGl単鎖Fabについては63個のアミノ酸からなるリンカーペプチドを用いて200mg/lに達する生産量が観察された。現在、二つの単鎖Fabのアミノ酸配列のどのような違いが生産効率の差の原因となっているかを解析しつつある。
B.brevis was used to treat IgG1Fab. The results showed that the growth rate of 100mg/l was higher than that of others. The quantity of prokaryotes is much less than that of B.brevis. The cause of the disease is clear, the antibody fragment is Bacillus lichenniformis α-antibody, and the antibody fragment is fusion. The department of information management B. breviss is responsible for the production of large quantities of food (3.5g/l), writing, flipping, and secreting. The process of secretion is harmful, and the stability is very important. In the first place, the anti-virus drugs were used to prevent IgG1Fab infection. The fusion products were fused to make sure that the secreted cells were secreted in the culture floor. Results the results showed that there were significant differences in the process of writing, flipping, and secreting anti-IgG1Fab drugs in the process of writing, flipping, and secreting acid in B.brevis. Now, we have to analyze the data in the same line. 19, 32, 43, 53, and 63 antiviral drugs were linked to antiretroviral IgG1. Fab showed that the secretion was registered and B.brevis was transferred to the hospital. According to the results of the test, the highest levels of health (10mg/l) were measured in 43 health care centers. On the one hand, the production of anti-IgGl white blood cell antigen (Fab) was detected by Elisa in 63 anti-HBs. 200mg/l Elisa was used to detect the production of leukocyte antigens. At present, the reason for the poor health rate is due to the analysis of the reasons for the difference in the rate of birth due to the distribution of acid in Fab.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Toshihiro Ohta: "Development of new tester strains derived from E.coli WP2uvrA for the determination of mutational specificity." Mutation Research. 413. 219-225 (1998)
Toshihiro Ohta:“开发源自大肠杆菌 WP2uvrA 的新测试菌株,用于确定突变特异性。”
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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Shoko Kimura:“水蚤、大型水蚤中两域血红蛋白链在缺氧条件下的异质性和差异表达。”
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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Masaki Kojima:“使用 pH 跳跃法分析黑曲霉酸性蛋白酶 A 的折叠中间体。”
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
山形秀夫(共編著): "生命科学への誘い" 東京化学同人, 146 (1998)
山形秀夫(合编):《生命科学的邀请》东京化学同人,146(1998)
- DOI:
- 发表时间:
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- 作者:
- 通讯作者:
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山形 秀夫
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