权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

超耐熱性α-アミラーゼの熱失活における可逆的及び不可逆的過程の分別解析

超热稳定 α-淀粉酶热灭活可逆和不可逆过程的差异分析

基本信息

批准号：
05680547
负责人：
山形秀夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680547/
关键词：
α-アミラーゼ耐熱性アミノ酸置換部位特異的変異誘起

项目摘要

Bacillus amyloliquefaciensのα-アミラーゼ(BAA、低耐熱性)とB.licheniformisのα-アミラーゼ(BLA、超耐熱、耐アルカリ性)を材料とし、不可逆的熱失活過程に影響を与えるアミノ酸配列(N末端から176〜178番目、BAAではArg-Gly-Glu、BLAでは欠失-欠失-Gln)について引き続き部位特異的変異誘起法によるアミノ酸置換を行った。Arg-Glyを欠失しGluを残した改変BAAを作製し、その熱安定性解析を行った結果、176及び177番目の残基の欠失が不可逆的熱失活の速度を顕著に遅くするという以前の推論が正しいことを確認した。また可逆的熱失活過程に影響を与えるアミノ酸配列(266から269番目、BAAではAsn-Ala-Gly-Lys、BLAではAsp-Leu-Gly-Ala)についてアミノ酸置換による解析を続行した。この部位の配列のみが完全にBLA型となった改変BAAを新たに作製して解析し、以前の解析とあわせた結果、266番目のAsnのAspへの、また269番目のLysのAlaへの置換の影響が主要であり、267番目のAlaのLeuへの置換の影響は小さいことがわかった。一方、Bacillus brevisを宿主とする異種タンパク質の分泌生産系を一層改良し、上記の改変α-アミラーゼを大量に生産した。これを用いて熱失活過程について円二色性等の物理化学的測定を行った。しかし測定に必要な高い濃度においては、改変α-アミラーゼの凝集が観察され、意味のあるデータは得られなかった。BLAは超耐熱性であるとともに耐アルカリ性でもあるので、凝集の起こらないアルカリ性溶液中での熱失活過程について解析を行いつつある。

Bacillus amyloliquefaciens α-Amorpha (BAA, low heat resistance) and B.licheniformis α-Amorpha (BLA, super heat resistance, high heat resistance) are materials affected by irreversible thermal inactivation process and acid alignment (N-terminal range 176 ~ 178, BAA range Arg-Gly-Glu, BLA range Arg-Glu-Gln). The results of thermal stability analysis of Arg-Gly residues and BAA residues were analyzed. The results of thermal stability analysis of Arg-Gly residues were analyzed. The reversible thermal inactivation process affects the analysis of acid substitution (266 ~ 269, BAA ~ Asn-Ala-Gly-Lys, BLA ~ Asp-Leu-Gly-Ala). The results of previous analysis showed that Asn of 266 items and Lys of 269 items had the main effect of substitution, and Ala of 267 items had the small effect of substitution. The production system of Bacillus brevis is improved and the production of Bacillus brevis is improved. This is a method for the determination of physico-chemical properties such as dichroism during thermal inactivation. To determine the necessary high concentration, change the α-level aggregation, meaning that BLA is heat resistant, heat inactivated in solution due to aggregation.