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バイオターゲティング素子としての抗体断片の高効率生産と構造機能解析

作为生物靶向元件的抗体片段的高效生产和结构功能分析

基本信息

批准号：
11132266
负责人：
山形秀夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11132266/
关键词：
Bacillus brevis Fab 分泌融合遺伝子 α-アミラーゼ CH1ドメイン

项目摘要

B. brevis系における抗ヒトウロキナーゼ1gG1 Fabの生産量は、単純なフラスコ培養の結果としては他の系における生産量より高い。しかし、その量はB. brevisにおける原核生物由来のタンパク質の生産量と比較すると低い。この原因を明らかにするため、抗体断片とBacillus licheninformisのα-アミラーゼ(BLA)との融合遺伝子を作製して、その発現について解析した。BLAはB. brevis系において大量(3.5g/l)に生産されることから、転写、翻訳、分泌過程における障害が殆どなく、分泌後のタンパク質としての安定性も非常に高いと考えられる。まず抗ヒトウロキナーゼ1gG1 FabのH鎖遺伝子との融合遺伝子を作製してB. brevisによる発現・分泌を試みたが成功しなかった。そこでH鎖の遺伝子から様々な断片を欠失させ、それぞれについて融合遺伝子を作製し、B. brevisへの導入を試みた。培地中に分泌された遺伝子産物を抗ヒトFab及び抗BLA抗体を用いたウェスタンブロット法により定量した。この結果、VHドメインおよびCH1ドメインの後半部にはB. brevisにおける発現を顕著に阻害する配列は含まれていないと考えられた。融合遺伝子に含まれているCH1ドメインの前半部が長くなるに従い、分泌量が低下することからこの部分に存在する少なくとも2つの配列がB. brevisにおける発現・分泌を阻害していることが示唆された。今後この部分について更に詳細な解析を行う予定である。CH1ドメインの配列は抗原特異性の違いに関わらず保存されている配列であり、この解析により抗体の生産効率の改善に役立つ普遍的な知見が得られるものと期待される。

B. Brevis is the most resistant strain to 1gG1 Fab production.しかし、その量はB. Brevis is a relatively low prokaryote origin protein producer. The reasons for this are clear, and antibody fragments and Bacillus lichenformis α-amyloid (BLA) and fusion proteins are analyzed. BLAはB. Brevis is produced in large quantities (3.5 g/l) and has a very high stability during production, secretion, inversion and secretion. The fusion gene of Fab 1 and Fab 2 is produced by the fusion gene of Fab 1 and Fab 2. Brevis is a success story. B. A. B. A. C. A. B. A. C. A. D. C. A. D. D. Brevis Anti-Fab and anti-BLA antibodies were quantified using the anti-BLA method. As a result, VH and CH 1 are the last half of the list. Brevis is the only one who has the ability to do so. The fusion gene contains the first half of CH1 and the second half of CH1 and the first half of CH1 and the second half of CH1. Brevis is the first to appear in the body. In the future, this part will be analyzed in more detail. CH1 antibody alignment is expected to improve antibody production efficiency by maintaining antigen specificity.