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蛋白質分泌生産系を用いた抗体可変領域構造の安定化に関する研究

利用蛋白质分泌产生系统稳定抗体可变区结构的研究

基本信息

批准号：
04660112
负责人：
山形秀夫
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス・ヒトキメラ抗ヒトウロキナーゼ抗体H鎖およびL鎖cDNA(武田薬品工業より分与)の可変領域をコードする部分(VH-およびVL-DNA)をPCR法により増幅した。増幅したDNAをBacillus licheni-formisのα-アミラーゼ遺伝子の中のα8/β8バーレル構造上部または下部に存在するループをコードする部分にそれぞれ挿入した。VH-DNAを挿入した遺伝子とVL-DNAを挿入した遺伝子との間の組み換えにより融合遺伝子を作製し、Bacillus brevis47に導入した。このようにして得られるB.brevisの形質転換株の中から抗原結合能を持つ融合蛋白質を生産するクローンを検索したが、現在のところ目的のクローンは得られていない。本研究目的達成のためには、B.brevisを宿主としたヒトおよび動物蛋白質の分泌生産の効率を一層改善する方法の開発が必要であると考えられた。そこでヒトインターロイキン2、ヒト上皮細胞増殖因子遺伝子を用いて、分泌ベクターのシグナルペプチドに種々の改変を行い、また複製領域としてB.brevis由来プラスミドの複製領域を利用することを試みた。この結果ヒトインターロイキンについては従来の系の約50倍、ヒト上皮細胞増殖因子については約5倍に達する生産効率改善に成功した。また異種蛋白質の分解に主要な役割を果している大腸菌lon遺伝子と相同的なB.brevis遺伝子及び菌体外蛋白質の分解を阻害しているB.brevisのプロテアーゼインヒビター遺伝子を単離し、その役割について解析した。現在これらの研究で得られた知見を応用し、上記の融合蛋白質を効率よく生産するクローンの分離を行いつつある。

The PCR amplification of the variable domain (VH-and VL-DNA) of the anti-HIV antibody cDNA(Takeda Pharmaceutical Corporation) The α8/β8 structure of Bacillus licheni-formis is composed of the upper part and the lower part. VH-DNA fusion gene and VL-DNA fusion gene were introduced into Bacillus brevis47. B.brevis has the ability to bind to antigens and to produce fusion proteins. This study aims to explore ways to improve the secretion efficiency of animal protein by B.brevis. 2. The use of epithelial growth factor gene, secretion of epithelial growth factor gene, and the use of replication domain. As a result, the production efficiency of human epithelial growth factor was improved by about 50-fold and 5-fold respectively. In addition, the degradation of heterologous proteins is mainly affected by the isolation and analysis of E. coli lon genes and the same B. brevis genes, as well as the inhibition of protein degradation in vitro. Now the research has been carried out to find out the application of fusion protein in production and isolation.