ショウジョウバエの生殖細胞に特異的な新規核内蛋白質キナーゼDmnkの機能解析

果蝇生殖细胞特异的新型核蛋白激酶 Dmnk 的功能分析

• 批准号: 10160212
• 负责人: 南 康博
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10160212/
• 关键词: 核内キナーゼ; ショウジョウバエ; Dmnk; 生殖細胞; 母性効果遺伝子; スプライシング制御; 線虫

本年度の研究においては、ショウジョウバエの生殖細胞に特異的に発現する新規核内蛋白質キナーゼDmnk(Drosophila maternal nuclear kinase)の細胞レベルにおける詳細な発現解析を行った。Dmnkは卵形成過程における択一的スプライシングの結果、Dmnk-L,Dmnk-Sの2種のキナーゼが存在することが明らかとなっている。そこで、まずエピトープタギングを行ったDmnk-L,Dmnk-S蛋白質をCOS細胞に遺伝子導入により強制発現させ、これらのキナーゼ蛋白質の細胞内局在を免疫化学的方法により解析した。その結果、Dmnk-Lが殆ど核内においてのみ局在が認められるのに対し、Dmnk-Sは細胞質内、核内の両者に局在することが明らかとなった。従って、これらの2つのキナーゼが細胞内において異なる機能を有する可能性が示唆された。現在、Dmnkの機能を明らかにする目的で、Dmnkと会合する分子の検索をyeast twohybrid法を用いて行っているが、既に既存のあるボディーパターン形成に関わる遺伝子産物と会合することを示唆する知見を得ている。また、データベース解析を行ったところ、線虫においてもDmnkの相同キナーゼ(Cmnk:C.elegans ortholog of Dmnk)が存在することが明らかとなった。Cmnkの機能を明らかにする目的で、RNAi法による解析を行ったところ、Cmnkの発現を抑制すると多くの線虫胚において胚性致死の表現型が認められるが、一部では発生が進行し(エスケーパーと呼ばれる表現型)発生が進行した線虫においては、him(high incidence ofmale)と呼ばれる表現型が観察された。また、RNAi法を行った線虫においては減数分裂の異常が認められることが明らかとなった。

This year's research focuses on the analysis of new nuclear protein Dmnk(Drosophila maternal nuclear kinase) in germ cell-specific development. Dmnk is the result of egg formation, and two kinds of Dmnk-L and Dmnk-S exist. Dmnk-L,Dmnk-S proteins are introduced into COS cells under stress and analyzed by immunochemical methods. As a result, Dmnk-L is almost in the middle of the nucleus, and Dmnk-S is in the middle of the nucleus. The possibility of having different functions in the cell is indicated by the number of cells in the cell. Now, the function of Dmnk is clear, and the molecular search of Dmnk and convergence is carried out by the two-hybrid method. The existing molecular search is related to the formation of molecular search products and convergence. The same as C.elegans ortholog of Dmnk, C.elegans ortholog of Dmnk exists. Cmnk functions are clearly defined, RNAi methods are analyzed, Cmnk expression is inhibited, and many embryonic death phenotypes are recognized. Some of them are developed, and the phenotype of Cmnk is detected. The method of RNAi is used to detect the abnormality of meiosis.

项目成果

Liu, Z-J., --, Minami, Y.: "Functional co-operation of cyclin C and c-Myc in mediating homotypic cell adhesion via VLA-4 activation and VCAM-1 expression"Blood. 92. 4700-4711 (1998)

Liu, Z-J., --, Minami, Y.：“细胞周期蛋白 C 和 c-Myc 通过 VLA-4 激活和 VCAM-1 表达介导同型细胞粘附的功能合作”Blood。

Liu, Z-J., --, Minami, Y.: "A critical role for cyclin C in promotion of the hematopoietic cell cycle by co-operation with c-Myc"Mol. Cell Biol.. 18. 3445-3454 (1998)

Liu, Z-J., --, Minami, Y.：“细胞周期蛋白 C 通过与 c-Myc 合作促进造血细胞周期的关键作用”Mol。

Oishi,I.,…Minami,Y.: "Spatio-temporally regulated expression of receptor tyrosine kinases,mRor1,mRor2,during mouse development : implications in development and function of the nervous system." Genes to Cells. 4. 41-56 (1999)

Oishi, I.,…Minami, Y.：“小鼠发育过程中受体酪氨酸激酶 mRor1、mRor2 的时空调节表达：对神经系统发育和功能的影响。”4. 41-56。 (1999)

Oishi,I.,…Minami,Y.: "A novel Drosophila nuclear protein serine/threonine kinase expressed in the germline during its establishment." Mech.Dev.71. 49-63 (1998)

Oishi, I.,…Minami, Y.：“一种新型果蝇核蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶在其建立过程中在种系中表达。”Mech.Dev.71 (1998)。

Minami,Y.,-,Yamamura,H.: "Redox regulation of cell signaling and its clinical applications." Marcel Dekker Inc.NY,USA(印刷中), (1999)

Minami, Y.,-, Yamamura, H.：“细胞信号传导的氧化还原调节及其临床应用。”Marcel Dekker Inc.，美国纽约（正在出版），（1999 年）