減数分裂におけるDmnk/Cds1キナーゼ及びRNA結合蛋白質の機能解析

减数分裂过程中 Dmnk/Cds1 激酶和 RNA 结合蛋白的功能分析

• 批准号: 12029216
• 负责人: 南 康博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12029216/
• 关键词: 生殖細胞; 核内キナーゼ; Dmnk; 線虫; Ce-Cds-1; 減数分裂; 相同組み換え; RNAi法

本年度の研究においては、まずショウジョウバエの生殖細胞核内に特異的に発現する蛋白質キナーゼDmnk(Drosophila maternal nuclear kinase)とRNA結合蛋白質Orbとの結合様式の解析を行った。その結果、DmnkのFHA(forkhead associated)ドメイン、リンカードメインが両者の会合に必要なこと、Dmnk-Lに存在する17アミノ酸残基の挿入部位が両者の結合に阻害的に働くことが明らかとなった。また、Orb蛋白質のQ-richドメインを含む領域が、両者の会合に必須であることが示された。さらに、EMSA法ならびに免疫沈降/PCR法により、Orb蛋白質がDmnk mRNAの3′UTRに結合することを明らかにした。線虫のDmnk相同分子(Ce-Cds-1)については、データベース解析によりCe-Cds-1に加え、Ce-Cds-2が存在する可能性を見出した。既に、Ce-Cds-1(Ce-Cds-2)が卵形成過程の減数分裂における相同組み換えに必須の役割を担うことを明らかにしていたが、本年度は、RNA干渉法によりCe-Cds-1(Ce-Cds-2)が精子形成過程においても必須の役割を担うことを示した。さらに本年度の研究においては、哺乳動物のDmnk,Ce-Cds-1,2相同分子であるChk2の遺伝子クローニングを行い、Chk2がリンパ球系悪性腫瘍の放射線感受性の制御に関わることを示唆する知見を得ている(未発表)。

This year's research focused on the analysis of binding patterns of Dmnk(Drosophila maternal nuclear kinase) and RNA-binding protein Orb in germ cell nuclei. As a result, Dmnk's FHA(forkhead associated) is necessary for the combination of Dmnk and Dmnk-L, and Dmnk-L is necessary for the combination of Dmnk and Dmnk. The Q-rich protein contains the domain and the convergence of the protein. EMSA and immunoprecipitation/PCR methods are used to detect the binding of Dmnk mRNA to the ORB protein. The possibility that the same molecule (Ce-Cds-1) of the nematode's Dmnk may exist, and Ce-Cds-1 may be added to Ce-Cds-1 and Ce-Cds-2 may exist during data analysis. In addition, Ce-Cds-1(Ce-Cds-2) is the same group as meiosis during egg formation, and it is necessary to carry out the necessary separation. This year, RNA stem method is used to carry out Ce-Cds-1(Ce-Cds-2) and sperm formation. In this year's study, we found that the same molecule of Dmnk,Ce-Cds-1,2 in mammals, Chk2, and Chk2 are related to the control of radiation sensitivity in spherical tumors (unreported).

项目成果

Takeuchi,S.: "mRor2 receptor tyrosine kinase is required for the heart development and limb formation."Genes to Cells. 5. 71-78 (2000)

Takeuchi,S.：“mRor2 受体酪氨酸激酶是心脏发育和肢体形成所必需的。”基因到细胞。

Umehara,H: "CX3C-chemokine, fractalkine predominantly functions as an adhesion molecule in monocytic cell line, THP-1 cells."Immunology and Cell Biol.. (印刷中). (2001)

Umehara, H：“CX3C 趋化因子，fractalkine 在单核细胞系 THP-1 细胞中主要充当粘附分子。”免疫学和细胞生物学（2001 年出版）。

南康博: "酸化ストレス・レドックスの生化学"共立出版. 8 (2000)

Yasuhiro Minami：“氧化应激和氧化还原的生物化学”Kyoritsu Shuppan 8 (2000)。

Tanaka,Y.: "ICAM-1 distinguishes functional heterogeneity of synovial cells in patients with rheumatoid arthritis : involvement of cell cycle machinery."Arthritis Rheum.. 43. 2513-2522 (2000)

Tanaka,Y.：“ICAM-1 区分类风湿性关节炎患者滑膜细胞的功能异质性：细胞周期机制的参与。”Arthritis Rheum.. 43. 2513-2522 (2000)

Oishi,I.: "Critical role of a C.elegans homolog of Cds1/Chk2-related kinase, Ce-CDS-1, in meiotic recombination."Mol.Cell.Biol.. 21. 1329-1335 (2001)

Oishi,I.：“Cds1/Chk2 相关激酶 Ce-CDS-1 的线虫同源物在减数分裂重组中的关键作用。”Mol.Cell.Biol.. 21. 1329-1335 (2001)