マウス初期歯胚発生に関わる新規蛋白質キナーゼの検索・同定

参与小鼠早期牙胚发育的新型蛋白激酶的搜索和鉴定

• 批准号: 09877005
• 负责人: 南 康博
• 金额: --
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877005/
• 关键词: 初期胚発生; 胚盤胞; 栄養外胚葉; 内部細胞塊; 始原生殖細胞; 蛋白質キナーゼ; PCR

本年度の研究においては、まずマウス初期胚盤胞において特異的に発現する新規蛋白質キナーゼ(以下キナーゼ)の検索・同定を試みた。Jackson Laboratory(USA)より供与された初期胚盤胞特異的cDNA libraryを鋳型とし、キナーゼにおいて良く保存されている亜領域VIB、IXに対応するdegenerate primersを用いてPCR法を行い、キナーゼ亜領域VIB、IX間の塩基配列を増幅後その塩基配列を決定した。その結果、計14種のキナーゼを同定することが出来たが、いずれも既存のキナーゼであった。(その内訳は、PDGF受容体をはじめとする5種の受容体型チロシキナーゼ、Srcをはじめとする5種の非受容体型チロシンキナーゼ、及び4種の細胞周期制御に関わるセリン・スレオニンキナーゼである。)本研究を行っている過程において、我々はショウジョウバエの生殖細胞成立に関わる新規核内セリン・スレオニンキナーゼDmnkの同定に成功した。そこで、Dmnkのマウス相同分子を検索・同定する目的で、熊本大学阿部博士から供与を受けたライブラリーを用い、まず胎生13.5日のマウス胚より単離された始原生殖細胞(PGC)特異的cDNAライブラリーを鋳型とし、上述の手法を用い、PGCにおいて発現する新規キナーゼの検索を行った。その結果現在までに、17種のキナーゼを同定することが出来た。これらのキナーゼの内、15種は既知のキナーゼであったが、2種のキナーゼは新規のキナーゼであることが明らかとなった。今後これら2種のキナーゼ遺伝子のcDNA全長のクローニング、詳細な発現解析を行う一方、さらに新規キナーゼのスクリーニングを継続することでDmnkのマウス相同分子の検索・同定を行いたいと考えている。

This year's study focused on the development of new proteins in early blastoderm cells and their identification. Jackson Laboratory(USA) provides a cDNA library specific to early blastoderm cells that is well preserved in the regions VIB and IX. Degenerate primers are used to determine the nucleotide alignment between regions VIB and IX by PCR. There are 14 kinds of unsolved problems. (5 kinds of receptor-type, 5 kinds of non-receptor-type, and 4 kinds of cell-cycle control) In this study, the process of reproduction was studied, and the identification of germ cells was successfully carried out. For the purpose of identifying and identifying the same molecules, Dr. Abe of Kumamoto University proposed a new method for identifying and identifying cDNA specific to primordial germ cells (PGC) at 13.5 days after birth. There are 17 kinds of results. 15 kinds of knowledge, 2 kinds of new rules In the future, the cDNA of two kinds of genes will be analyzed in detail, and the new gene will be analyzed in detail.

项目成果

Isao Oishi: "Kinases ans phosphatases in lymphoyte and neuronal signaling" Springer (H.Yakura Ed.), 2 (1997)

Isao Oishi：“淋巴细胞和神经元信号传导中的激酶和磷酸酶” Springer (H.Yakura Ed.)，2 (1997)

Isao Oishi: "A novel Drosophila nuclear protein serine/threonine kinase expressed in the germline during its establisment." Mech.Dev.(印刷中). (1998)

Isao Oishi：“一种新型果蝇核蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶在其建立过程中在种系中表达。”（正在出版）。