転写とDNA修復のカップリングの分子機構の研究

转录与DNA修复耦合的分子机制研究

• 批准号: 10165210
• 负责人: 大熊 芳明
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10165210/
• 关键词: 転写; RNAポリメラーゼII(PolII); 基本転写因子; TFIIH; TFIIE; リン酸化; 線虫; 遺伝病

1. 線虫TFIIEホモログの同定と解析真核生物では遺伝子の2本鎖DNAのうち、RNAポリメラーゼII(PolII)が転写を行っている鎖が紫外線等により傷害を受けた場合、非転写鎖よりも素早く修復される、転写とカップルしたDNA修復が知られている。その際に重要な役割を果たす基本転写因子TFIIHとそれを制御するTFIIEの解析の目的で、これまでヒトTFIIEの構造と活性の相関を欠失変異体を用いて解析し、20〜30アミノ酸の範囲内に活性領域を特定した。現在更に個々のアミノ酸レベルで解析を進めるため、異なる種間でホモログを取りアミノ酸配列の保存性を調べている。今回、線虫からTFIIEホモログを同定し、解析した。まず小さいTFIIEβサブユニットは、大腸菌で発現、精製してヒトと転写機能が置き換るかを調べると、不完全ながら置き換った。一方、線虫TFIIEαは置き換らなかった。TFIIHのPolIIリン酸化のTFIIEによる促進活性について調べると、転写と良く一致して線虫TFIIEβではリン酸化が促進されるのに対し、線虫TFIIEαではリン酸化の促進は見られなかった。2. TFIIHの欠損に起因する遺伝病患者由来の欠損THIIHの活性と機能の解析TFIIHは9サブユニットよりなり、転写だけでなくDNA除去修復に関与する重要な蛋白である。特に、大きい2サブユニットXPBとXPDがDNA修復に直接関わっている。遺伝的にこれらに欠損を有する家系が存在し、患者は転写、DNA修復能が低下することにより癌になりやすかったり、発育や神経系の発達が遅れていることが明らかにされている。今回、これらのサブユニットに欠損を有する2種の細胞から欠損TFIIHを精製し、そのサブユニット構成や転写、DNA修復における活性を調べた。すると転写やDNA修復活性の低下と患者の病態に相関性があることが分った。

1. TFIIE is the same as TFIIE. It analyzes the DNA of the two locks in eukaryotes. It analyzes the DNA of the two locks in eukaryotes. It analyzes the DNA of the two locks in eukaryotes. It analyzes the DNA of the two locks in eukaryotes. The analysis of the structure and activity of TFIIE is based on the analysis of TFIIH and TFIIH, and the analysis of TFIIH and TFIIH is based on the analysis of TFIIH and TFIIH. Now, we are going to analyze and analyze the acid sequence in different species, and adjust the preservation of acid sequence. Now, the line worm TFIIE is fixed, analyzed. TFIIEβOne side, thread worm TFIIEα reverse set. TFIIH's PolII acidification and TFIIE's promotion activity are regulated, regulated, and well coordinated. TFIIEβ 's acidification and promotion activity are regulated, regulated, and TFIIEα 's acidification and promotion activity is regulated. 2. Analysis of the activity and function of THIIH in patients with TFIIH deficiency and the origin of TFIIH deficiency XPB and XPD are directly related to DNA repair. There is a lack of DNA repair in the family, and the patient has a low DNA repair ability. There are two kinds of cells in this study: TFIIH purification, DNA repair and DNA repair. There is a correlation between low DNA repair activity and pathological changes in patients.

项目成果

Kai,M.et al.: "A new Drosophila ultraiolet light-damaged DNA recognition endonuclease that selectively nicks a (6-4) photoprodnct site." Biochem.Biophys.Acta. 1397. 180-188 (1998)

Kai,M.等人：“一种新的果蝇紫外线光损伤 DNA 识别核酸内切酶，可选择性地切割 (6-4) 个光产物位点。”

Okamoto,T.et al.: "Analysis of the role of TFIIE in transcriptional regulation through structure-function studies of the TFIIB subunit." J.Biol.Chem.273. 19866-19876 (1998)

Okamoto,T.et al.：“通过 TFIIB 亚基的结构功能研究分析 TFIIE 在转录调控中的作用。”

Sugasawa,K.et al.: "Xerederma pigmentosim gnap C protein complex is the intiatov of global genome nucleotide excision repair." Mol.Cell.2. 223-232 (1998)

Sugasawa,K.et al.：“着色性干皮病 gnap C 蛋白复合物是全基因组核苷酸切除修复的启动剂。”

Fujiwara,Y.et al.: "Detection,purificution and characterization of a protein that birds the (6-4) photoprodact-containing DNA in Hela cells." Nucleic.Acids.Symp.Ser. 37. 277-278 (1997)

Fujiwara,Y.et al.：“在 Hela 细胞中检测、纯化和表征一种含有 (6-4) 光产物 DNA 的蛋白质。”