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基本転写因子の欠損による遺伝病の病態と機能の関連性に対する生化学及び遺伝学的解析

基本转录因子缺乏所致遗传病病理与功能关系的生化及遗传学分析

基本信息

批准号：
12877359
负责人：
大熊芳明
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877359/
关键词：
転写開始 PolII 線虫 TFIIE TFIIH 色素性乾皮症 CTDリン酸化 XPG

项目摘要

1.線虫TFIIEを用いたPolIIの転写開始から伸長への移行段階の解析我々は、TFIIEの機能を解析する目的で線虫TFIIEを単離しヒトTFIIEと比較検討した。ヒトと線虫TFIIEのサブユニットを組み合わせたキメラTFIIEを発現・精製し、転写再構成系にてヒトTFIIEと機能的互換性を検討したところ、線虫βはヒトβと部分的に置き換ったが、線虫αは置き換らなかった。原因を検討すると、線虫αはヒトβとの結合活性が10%以下となりヒトTFIIEの様な転写活性を示さないことが分った。一方、線虫βはヒト転写系では伸長への移行活性が低かった。TFIIEは、PolII最大サブユニットのCTD配列の2番目と5番目セリンのTFIIHによるリン酸化を促進する。ヒトαと線虫βのキメラでCTDリン酸化を調べると、5番目セリンリン酸化活性が著しく低下していた。このことから今回、伸長への移行はPolIICTDの5番目セリンリン酸化と密接な関連性があることが示唆された。2.TFIIHを欠損する遺伝病患者細胞の欠損TFIIHのDNA修復反応における他因子との協調的制御機能の解析TFIIHはPolIIの転写に必要であるが、一方、紫外線等によるDNA傷害修復にも直接関与し、9サブユニットの2個XPBとXPDのどちらか一方に変異が入ることで発がんを伴う色素性乾皮症(XP)が発症する。我々は、これまでにTFIIHが遺伝子DNA上の紫外線、薬剤等による傷害部位にDNA修復因子が集まり修復する際に、形成される複合体内で損傷を認識することを明らかにしたXPCと損傷DNA部位の3'側を切断するXPGの2者に結合し機能することを見出している。今回、これら因子が実際にヒト細胞内でTFIIHと相互作用し、その際紫外線、薬剤により損傷を生じたDNAとの相互作用の効率は、損傷の無いものより高いことを明らかにした。

1. TFIIE is used to analyze the transition stages of PolII, TFIIE and TFIIE. TFIIE's structure is composed of two parts: one part is composed of two parts; the other part is composed of two parts; the other part is composed of three parts; the third part is composed of three parts; the fourth part is composed of four parts; the fourth part is composed of three parts; the fourth part is composed of three parts; the fourth part is composed For reasons discussed, the binding activity of nematode α to nematode β is less than 10%, which is why the binding activity of nematode TFIIE is shown. The migration activity of the strain is low. TFIIE, PolII maximum support for CTD alignment of the 2-way and 5-way support for TFIIH The activity of α and β is lower than that of α and β. This is the first time that the United States has made such a move. 2. Analysis of the regulatory function of TFIIH DNA repair in defective cells of patients with TFIIH DNA damage. The regulatory function of TFIIH DNA repair in defective cells of patients with TFIIH DNA damage is directly related to DNA damage repair in patients with TFIIH DNA damage. The DNA repair factors in the damaged sites of TFIIH DNA, such as ultraviolet rays and chemicals, are integrated into the repair process and form a complex to recognize the damage in the damaged sites of TFIIH DNA. In the present case, the factor is present in the intracellular TFIIH interaction, in the presence of ultraviolet light, in the presence of DNA damage, in the absence of DNA damage, in the presence of light.