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細胞接着とシグナル伝達に関わるERMファミリーとMab21の構造化学的解析

ERM家族和Mab21参与细胞粘附和信号转导的结构化学分析

基本信息

批准号：
10179210
负责人：
武内恒成
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10179210/
关键词：
細胞接着シグナル伝達構造化学蛋白質大量発現系

项目摘要

l 細胞接着・細胞膜裏打ちに機能するERMファミリー分子(エズリン、ラディキシン、モエシン(ERM))蛋白質の構造解析と、細胞内シグナル伝達における制御機構。及び、新規神経特異的アクチン結合蛋白質Clinpin Cを中心とした、WD40ドメインの生理学的機能解析と3次元構造解析。ERM分子群はリン酸化、脱リン酸化状態で構造変化を取り、また、様々な細胞内シグナル伝達分子と結合し機能している。このうち特にラディキシンの全長、及びドメインのバキュロウィルスによる発現系に成功しており、その電子顕微鏡観察による構造解析を進めつつある。また、この過程で新規アクチン結合蛋白質Clipin Cを同定できた。この分子は、神経特異的な、アクチン結合蛋白でその組織・細胞内分布と結合分子の同定を行った。結果、神経の軸策伸長、神経細胞移動に関わり、さらには細胞内小胞輸送にも関わる可能性を示唆できた。この分子内に存在するWD40ドメインは、従来、G蛋白質や様々な分子内に見られ分子間結合に関与する領域として知られるが、実際にClipin Cでも細胞基質間接着裏打ち分子のVinculinやsmall G蛋白質標的分子との結合が見られることを示した。このWD40領域を中心とした構造解析を進めるための大量発現系を構築した。2 Mab21分子の分子機能と構造化学的解析。我々が新たに同定したマウスMab21分子は、Hox転写因子の制御下で形態形成に関与する分子であると考えられ、実際、線虫において生殖感覚器形成に関与することが遺伝的に示されてきた。しかし、その分子機能は不明である上に、既知の分子群との相同性も全くみられない。今年度、この分子の詳細な組織局在と核移行のメカニズム及びその機能領域に関して解析を行った。また、構造解析のためのバキュロウイルスによる発現系に成功するとともに、この分子でカイコ多角体病ウイルスによる更なる発現系(3)を確立することができた。3 構造解析のためのカイコ多角体病ウイルスを用いた多量発現系の確立。主としてMab21を用いて、バキュロウイルス系よりも強力なカイコ多角体病ウイルス(BmNPV)による蛋白質多量発現系を確立した。さらにAcMNPVプロモーター系への改良により、さらに効率の良いMab21蛋白質の多量発現に成功するとともに、ClipinCのWD40ドメインのような発現が困難であった分子の多量発現にも成功した。

l Cells are connected and functional ERM molecules are built into the cell membrane. , ERM (ERM) protein structure analysis and intracellular ERM control mechanism. Functional analysis and 3-dimensional structural analysis of the physiological functions and 3-dimensional structure of Clinpin Clinpin Clinpin, a newly-specific アクチン binding protein, and WD40 ドメインの. The ERM molecule group is in the acidified and de-alinated state, and the structural changes are taken, and the molecules are combined and functionalized in the cell. The full length of このうち特にラディキシンの, and びドメインのバキュロウィルスによるThe success of the system has been achieved through the use of electronic microscopy and structural analysis. また、この processで新码アクチンbinding protein Clipin Cを同定できた.このmoleculeは、神経specific な、アクチンbinding protein でそのTissue and intracellular distribution and binding molecule の同定を行った. As a result, the possibility of elongation of the nerve axis, the movement of the nerve cells, and the possibility of intracellular transport of small cells are shown. Intramolecular existence of WD40 ドメインは、従来、G protein intramolecular intermolecular bonding and intermolecular bonding and する domain としてknowing られるが、実记にClipin CでもThe cell matrix is indirectly linked to the molecule Vinculin and the small G protein-labeled molecule is bound to the molecule. The structure analysis of the center of the WD40 field and the construction of a large number of systems have been carried out. 2 Analysis of molecular function and structural chemistry of Mab21 molecule. I'm a new Mab21 molecule with the same setting, and the shape is formed under the control of the Hox転factor. The child's test, the test, the nematode's reproductive organs are formed, and the test of the test is made.しかし, そのmolecule function is unknown, である上に, and the molecular group is known, and the sameness is all くみられない. This year, the details of the molecular organization are analyzed in the nuclear migration and functional fields.また、Structural Analysisのためのバキュロウイルスによる発Now the system is successful するとともに、このMolecular polyhedrosis ウイルスによる updated なる発 present system (3)をestablished することができた. 3. Structural analysis of polyhedrosis polyhedron disease and the occurrence of large amounts of polyhedrosis have been established. Main としてMab21をいて, バキュロウイルス Department よりもPowerful なカイコPolyhedrosis polyhedrosis (BmNPV) is a disease caused by excessive amounts of protein and has been established. The improvement of the AcMNPV system and the high efficiency of the Mab21 protein have been successful.るとともに、ClipinCのWD40ドメインのような発appears がdifficulty であったmolecule のa large amount of 発appears にもsuccessful した.