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神経回路網形成への新規モデル動物プラナリアとマウスを用いたアプローチ

使用新模型动物、涡虫和小鼠形成神经网络的方法

基本信息

批准号：
14658230
负责人：
武内恒成
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658230/
关键词：
神経回路網細胞接着分子新規モデル動物アンチセンス RNAi

项目摘要

哺乳類・マウスにおいて神経回路網形成に重要な役割を果たす、神経特異的免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子群の機能解析を最終目標として、最も原始的な脳を持つモデル動物プラナリアから免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子を幾つか単離し、機能解析とともにその分子の進化的側面も解析を進めた。プラナリアからは免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子群のうち、NCAM、DSCAM、TAG-1/contactinファミリーのプラナリアオルソログを単離、その全長クローニングとともにそれら分子に対する抗体作成も完了した。昨年度、これら分子のin situハイブリダイゼーションによって遺伝子レベルでの、プラナリア脳再生過程における発現解析を行っており、今回、蛋白質発現レベルでの生体内での発現様式も示すことが出来、脳の形成過程においてこれらの分子が機能相関を持ちながら形成に関わっていることを明らかにするとともに、微細な脳・神経回路網構造をこれら抗体を用いてより詳細に観察できる系を確立した。さらに、これらの分子のRNAiによるノックダウン実験を開始した。ただ、マウスによるノックアウトでは、これら接着分子は劇的なフェノタイプを示さなかったように、プラナリアにおいても単独ノックダウンでは大きな変化にはおよばないが、RNAi系の利点として幾つかの分子を協調してノックダウンすることによって、生体内でのこれら分子の機能をよりはっきりと示すことが出来た。また、我々が別の研究課題で立ち上げたカイコバキュロウイルスを用いた蛋白質発現系を用いてこれら分子を昆虫(カイコ)細胞上に発現し、接着分子の活性を計る系を新たに立ち上げる事に成功した。これら免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子はマウス同様、同種分子間では接着活性が高いこと、異種間でも弱い接着活性を持っていることも示すことが出来た。マウスにおいては、脳形態形成における転写因子群のノックアウトマウスによる解析を共同研究で進行させ、これらのプラナリアオルソログも単離し、これらのノックダウンも進めている。マウスによる解析と、プラナリアにおける解析を組み合わせるとともに、細胞生物学的な手法も駆使して神経回路網形成を解析する糸口を掴むことが出来た。

Mammals are involved in the formation of neural networks, important for the function analysis of neuro-specific immune systems and molecular populations, and the ultimate goal is to maintain the most primitive immune systems and molecular populations. The production of antibodies against the following molecular groups was completed: NCAM, DSCAM, TAG-1/contactin, and the production of antibodies against the following molecular groups. In the past year, the protein production process in vivo was analyzed, and the protein production process in vivo was analyzed. In the present year, the protein production process in vivo was analyzed, and the protein production process in vivo was analyzed. In the past year, the protein production process in vivo was analyzed, and the protein production process in vivo was analyzed. In the present year, the protein production process in vivo was analyzed, and the protein production process in vivo was analyzed. The micro-circuit network structure is used for detailed observation. This is the beginning of a new era of molecular RNAi. The RNAi system has the advantage of coordinating the molecules in vivo and showing the function of the molecules in vivo. The research topic of this paper is to establish a new system of protein discovery by using molecular biology in insect cells, and then to calculate the activity of molecular biology. The activity of the two molecules is high, and the activity of the two molecules is low. We will conduct joint research on the analysis of the formation and morphology of these factors. The analysis of cell biology and the formation of neural networks