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神経回路網形成への新規モデル動物プラナリアとマウスを用いたアプローチ

使用新模型动物、涡虫和小鼠形成神经网络的方法

基本信息

批准号：
14658230
负责人：
武内恒成
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658230/
关键词：
神経回路網細胞接着分子新規モデル動物アンチセンス RNAi

项目摘要

哺乳類・マウスにおいて神経回路網形成に重要な役割を果たす、神経特異的免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子群の機能解析を最終目標として、最も原始的な脳を持つモデル動物プラナリアから免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子を幾つか単離し、機能解析とともにその分子の進化的側面も解析を進めた。プラナリアからは免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子群のうち、NCAM、DSCAM、TAG-1/contactinファミリーのプラナリアオルソログを単離、その全長クローニングとともにそれら分子に対する抗体作成も完了した。昨年度、これら分子のin situハイブリダイゼーションによって遺伝子レベルでの、プラナリア脳再生過程における発現解析を行っており、今回、蛋白質発現レベルでの生体内での発現様式も示すことが出来、脳の形成過程においてこれらの分子が機能相関を持ちながら形成に関わっていることを明らかにするとともに、微細な脳・神経回路網構造をこれら抗体を用いてより詳細に観察できる系を確立した。さらに、これらの分子のRNAiによるノックダウン実験を開始した。ただ、マウスによるノックアウトでは、これら接着分子は劇的なフェノタイプを示さなかったように、プラナリアにおいても単独ノックダウンでは大きな変化にはおよばないが、RNAi系の利点として幾つかの分子を協調してノックダウンすることによって、生体内でのこれら分子の機能をよりはっきりと示すことが出来た。また、我々が別の研究課題で立ち上げたカイコバキュロウイルスを用いた蛋白質発現系を用いてこれら分子を昆虫(カイコ)細胞上に発現し、接着分子の活性を計る系を新たに立ち上げる事に成功した。これら免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子はマウス同様、同種分子間では接着活性が高いこと、異種間でも弱い接着活性を持っていることも示すことが出来た。マウスにおいては、脳形態形成における転写因子群のノックアウトマウスによる解析を共同研究で進行させ、これらのプラナリアオルソログも単離し、これらのノックダウンも進めている。マウスによる解析と、プラナリアにおける解析を組み合わせるとともに、細胞生物学的な手法も駆使して神経回路網形成を解析する糸口を掴むことが出来た。

Mammals・Mammals: It is important to form the circuit network of the nervous system and to develop immunity specific to the nervous systemグロブリンスーパーファミリーFollowing the functional analysis of the molecule group, the final goal is として, the most original Hajime's な脳をholding つモデル animal プラナリアからimmune グロブリンスーパーファミリー pick up The side of the evolution of the molecule is the side of the evolution of the molecule and the functional analysis.プラナリアからはimmune グロブリンスーパーファミリーfollowed by molecular group のうち, NCAM, DSCAM, TAG-1/contac tinファミリーのプラナリアオルソログを単里、そのfull lengthクローニングとともにそれらmolecule に対するAntibody preparation is completed. Last year, これらmoleculeのin situ ハイブリダイゼーションによって伝子レベルでの、プラナリア脳 regeneration process における発Now analyze を行っており, present chapter, protein 発appears レベルでの生内での発appear様style もshow すことが出,脳のFormation process においてこれらのmolecule がfunction related をhold ちながらformation に关わっていることを明らかにするとともに、Fine な脳・神経circuit network structure をこれらantibodies を Use いてより in detail に観Observation and できるsystem をestablished した.さらに、これらのmoleculeのRNAiによるノックダウン実験をStartした.ただ, マウスによるノックアウトでは, これらThe following is the なフェノタイプを of the molecular drama Showing さなかったように、プラナリアにおいても単多ノックダウンでは大きな変化にはおよばないが, RNAi system's advantage point として九つかのmolecule をcoordination してノックダウンすることによって、The function of the molecule inside the body is revealed.また、My 々ががのResearch Topic で立ち上げたカイコバキュロウイルスを用いたprotein発开户いてこれWhen a molecule appears on an insect cell, then the activity of the molecule is measured and the system is established, and the new thing is successfully established.これらimmune グロブリンスーパーファミリーmolecules はマウス Same 様, same kind of molecules ではThe activeness is high, the different species are weak, and the activeness is weak, and the activeness is maintained.マウスにおいては, 脳morphology formation における転风写 Factor Group のノックアウトマウスによるanalytic をResearch is carried out, research is carried out, research is carried out, and research is carried out.マウスによるanalytic と, プラナリアにおけるanalytic をgroup み合わせるとともに, cell Biological techniques are used to form a circuit network and analyze it.