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細胞接着制御蛋白質群の構造化学的解析と構造解析に向けた蛋白質大量発現系の構築.

细胞粘附调节蛋白的结构化学分析以及用于结构分析的大规模蛋白表达系统的构建。

基本信息

批准号：
12034214
负责人：
武内恒成
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12034214/
关键词：
蛋白質大量発現構造解析細胞骨格細胞接着

项目摘要

1)構造解析および蛋白質機能解析のために、バキュロウイルス発現系を上回る大量の天然型蛋白質を得ることができるカイコ核多核体病ウイルス(BmNPV)を用いた発現系を導入するとともに、バキュロウイルスSf9細胞にも感染できるベクター系を確立した。幾つかの分子で発現を試み、今までにClipinを含む8種類の蛋白質で発現に成功した。とくに、神経回路形成で重要な役割を果たす接着分子TAG-1とそのリガンドであるコンドロイチン硫酸プロテオグリカンPhosphacanの発現を行い、これらの激しい糖鎖修飾を受ける分子群でもされるべき修飾を受け生理活性を持つ分子を得られることを示した。昨年来、精製の条件も検討し、汎用できる系としていよいよ構造解析レベルにも耐えうるシステムを確立できた。2) 我々は、神経細胞のアクチン制御に関わる新規神経特異的アクチン結合蛋白質Clipin C/Coronin B5を同定し、解析を進めた。ヒト・マウスでは少なくとも5つのファミリー分子が存在し、それぞれにその発現は組織によって住分けていた。これらClipin/coroninファミリーの分子は、N末側に5つのWD40ドメインとC末側にβヘリックス領域を持っている。WD40ドメインはG蛋白質βや、TAF-II、β-COPなど様々な分子にみられ、分子間相互作用に関わるとされるが詳細な機能は不明である。Clipin Cは少なくともこのWD40ドメインだけではアクチン結合は示さず、N末側とC末側にアクチン結合領域が存在していた。さらにこの分子群の機能を明らかにする目的で結合分子を検索した結果、すでに報告した細胞接着裏打ち分子のvinculinだけでなく、さらにp40phoxとも結合していることが、住本博士(九州大・生医研)との共同研究によりわかった。p40phohは、血球細胞において食作用NADPHオキシダーゼ群の細胞質内活性化因子の一つで、p67phox、p47phoxとともにその制御を司ること、また細胞極性形成への関与が知られる。我々は、p40phoxが神経系細胞にも広く存在することを示し、結合領域はClipinCのWD40ドメインであることを明らかにした。また、ClipinCの細胞への発現実験から、ストレスファイバーの制御や、特にRacの下流でラッフル膜形成に関わることを示した。p40phoxはp67phoxと常に結合しており、このp67phoxはRacと結合していることが知られている。つまり、ClipinCはp67/p40phoxを介してRacの制御をうけてアクチン制御・細胞極性形成に関わることが明らかとなった。

1)A large number of natural proteins were identified by structural analysis and protein functional analysis, and a large number of natural proteins were introduced into Sf9 cells to infect Sf9 cells. A few molecules have been successfully discovered, and now Clipin has been successfully discovered, containing eight types of proteins. This is an important part of the formation of neurocircuits. It is shown that TAG-1 and its derivatives are involved in the development of phosphoran, and that the group of molecules affected by sugar lock modification is involved in the development of physiologically active molecules. In the past year, the conditions for refining the system have been established. 2)The protein Clipin C/Coronin B5 was identified and analyzed in vitro. There are five kinds of molecules in the world, and they exist in the world. The Clipin/Coronin molecule is located on the N terminal side and the WD40 terminal side is located on the C terminal side. WD40-D protein beta, TAF-II, beta-COP, molecular interaction, detailed function unknown Clipin C has a small number of fields, such as WD40, N and C. The function of this molecular group is clearly defined. The binding molecule is detected. The results are reported. The vinculin of the cell is then detected. The p40phox is bound. Dr. Sumimoto (Kyushu University of Biomedical Research) is jointly studied. p40phoh is one of the activated factors in the cytoplasm of blood cells that eat NADPH OXIDES, and p67phox and p47phox are both involved in the control of cell polarity. The p40phox is the only one that exists in the brain. The development of Clipin C cells is related to the control of cell membrane formation, especially in Rac cells. p40phox p67phoxつまり、ClipinCはp67/p40phoxを介してRacの制御をうけてアクチン制御·细胞极性形成に关わることが明らかとなった。