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細胞膜情報伝達分子群の蛋白質大量発現系の構築と1分子観察操作法による解析

细胞膜信号分子大规模蛋白表达系统的构建及单分子观察技术分析

基本信息

批准号：
13014209
负责人：
武内恒成
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014209/
关键词：
細胞骨格蛋白質大量発現細胞接着

项目摘要

1)神経特異的アクチン結合蛋白質clipinCはWD40ドメインとC末側のαヘリックス構造からなる分子である。我々はこの分子の機能解析のために結合分子の検索を進め、NADPHオキシダーゼ活性化のアダプター分子の一つp40^<phox>が結合することをすでに見いだしている。今年度、この結合領域の検討を進め、p40^<phox>PCドメインがclipinCのWD40ドメインと結合することが明らかとなった。また、このp40^<phox>をはじめとするp47^<phox>・P67^<phox>を介してRacのシグナルがclipinCに伝わり、アクチン骨格制御に関わることを示した。さらに、p40^<phox>・p47^<phox>・p67^<phox>分子群が確かに神経系組織にも発現し、clipinCと共局在することを免疫組織化学等で見いだした。2)構造解析および蛋白質機能解析のため、バキュロウイルスを上回る大量蛋白質産生が可能なカイコ核多角体病ウイルス(BmNPV)を用いた発現系を導入している。我々は今までに8種類の蛋白質で発現に成功しているが、今年度、神経接着分子NCAMについて天然型だけでなく、糖鎖修飾領域を変異した分子の発現を行い、この系における昆虫型糖鎖修飾が哺乳類における糖鎖修飾といかに異なるかの解析を行った。さらに、いままで幼虫を用いた発現を進めてきたが、今年度から蛹(さなぎ)を用いても感染・発現が可能であることを見いだし、より簡易かつ蛋白質の精製の容易な系の確立を進めることが出来た。3)細胞接着分子NCAM, TAG-1、およびそのリガンドであるコンドロイチン硫酸プロテオグリカンPhosphacan/Neurocanのカイコバキュロにより産生した蛋白質を用いた1分子観察操作法による解析を開始した。リガンド刺激をすることによって、免疫グロブリンスーパーファミリー接着分子群が会合すること、いかに情報を細胞内に伝えるかを解析する系を構築した。

1)Neuro-specific protein clip-C-WD40-C-terminal structure The molecular function analysis of these molecules is based on the analysis of binding molecules, NADPH, NADPH<phox>, This year, the combination of field research progress, p40^<phox>PC P40, <phox>P47, <phox>P67, <phox>Rac, Rac. p40^<phox>p47^<phox>p67^<phox>molecular groups were identified by immunohistochemistry. 2)Structure analysis and protein function analysis are carried out in order to generate a large number of proteins, which can be used to develop nuclear polyhedrosis (BmNPV). We have successfully discovered 8 kinds of proteins, including NCAM, NCAM, In this year, the larvae are used to develop and develop, and in this year, the larvae are used to infect and develop. 3)Cell adhesion molecules NCAM, TAG-1, NCAM-1, NCAM-1, NCAM-1, The immune system is constructed by combining molecular groups and intracellular information.