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ウイルスの移行タンパク質を手がかりとした原形質連絡の機能解析

以病毒易位蛋白为线索的胞间连丝功能分析

基本信息

批准号：
10182210
负责人：
渡辺雄一郎
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

植物の組織を構成している細胞は、原形質連絡(plasmodesmata;以下 PD)を通じてシンプラスト系をなしている。PDは800以下の分子量の分子・物質の流通を妨げない。多くの代謝産物は PDを介してシンク・ソース組織・器官の間もシンプラストによって連続している。我々が扱ってきたタバコモザイクウイルス(TMV)の移行タンパク質(MP)は、PDを介して周囲の細胞にウイルスのゲノムRNAとともに移行する能力のあることが示された。このように特定のタンパク質にとってPDを介して周囲の細胞へと広がることが機能と密接に関連する可能性がある。MP:GFP(移行タンパク質とGFPのタンパク質の融合タンパク質)を発現する人工ΥMV、LQwt:G fusが完成できたおかげで、GFPの蛍光をたよりに生きている状態でPDが観察できるようになった。そこで非常に有用なツールを獲得した利点を活かし、MPの機能している状態を細胞学的にとらえ、また MPを一種マーカーのように用いてそのPDの構造を解析することを目的とした。並行して、MPのアミノ酸配列264残基のうちC末端31アミノ酸残基を欠失したMP:GFPを発現するウイルスLQD233:Gfusが細胞間移行できること、さらにその機能するC末端の欠失をもったMPが長くPDに存在することが明らかになった。本年度の途中からLQD233:G fusを用いるように切り替えた。現在、セルラーゼなどで処理し、穏和にPDを遊離させる条件を検討中。古典的な生化学的手法にて蛍光を発する分画=PD分画の精製を時間をかけておこない、そこに存在する特異的なタンパク質を単離する。MP:GFP分子の上を精製したチューブリン、アクチンがスライドしていくか、ATPase活性をあわせて機能解析をしたが、現在までのところ確認されていない。今後第3の因子を加えるなどして、動きに関与する因子を生化学的に追求する。

Plant tissues are composed of cells and plasmodesmata (hereinafter PD). PD is a molecular weight below 800 molecules·substances flow interference. Many metabolites of PD are involved in the development of tissue and organ metabolism. The ability to migrate between TMV (TMV) and PD is demonstrated by the ability of TMV to migrate between TMV and PD. The possibility of functional and close connection between the two groups is discussed. MP:GFP(migration and GFP fusion) is generated artificially, LQwt:G fus is completed, GFP is illuminated, and PD is detected. A very useful tool for analyzing cellular processes. In parallel, MP has no acid sequence 264 residues, C-terminal 31 amino acid residues are missing, MP:GFP is present, LQD233:Gfus is present, C-terminal 31 amino acid residues are missing, MP: GFP is present, LQD233:Gfus is present, C-terminal 31 amino acid residues are missing, MP: GFP is present, LQD 233: Gfus is present, Gfus is present. On the way to this year, LQD233:G fus is used in the middle of the year. Now, we're discussing the conditions for processing, processing, and PD release. The classical biochemical method of light emission =PD separation time, the existence of special separation quality MP:GFP molecule is refined and purified, ATPase activity is analyzed and confirmed. In the future, the third factor will be added to the biochemical pursuit.