アサガオにおける花の形態形成遺伝子のクローニング

牵牛花花形态发生基因的克隆

基本信息

批准号：
10182222
负责人：
仁田坂英二
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10182222/
关键词：
アサガオ duplicated 花器官形態形成遺伝子トランスポゾン Tpn

项目摘要

アサガオの突然変異体のほとんどがトランスポゾンの挿入によって誘発されていると考えられ、これらは非常に貴重な遺伝子資源であり、しかしこれらは国立遺伝学研究所から移管され、90年から系統の更新が行われていなかった。そのため本年度はほとんどの系統を栽培、更新した。また、これらの栽培した系統すべてについては写真記録を残した。アサガオで主として突然変異を起こしているTpnトランスポゾンは末端の塩基配列はどれも相同であり、遺伝子クローニングのためにトランスポゾンタギングが利用できる。その方法を開発するため以下のことを試みた。1)Tpnの末端配列のプライマーを用いた、突然変異系統と野生型のサブトラクション法。この方法ではバックグランドが均一でないため、どのTpnの挿入が突然変異形質に対応しているか同定に手間取っている。他の方法として、体細胞突然変異のDNAサンプルを用いて差のあるDNA断片を増幅するRDA法で比較することを試みている。2)Tpnファミリーの内部のプローブを用いて、解像度の高いサザンブロット法で突然変異体と野生型のゲノム構造も比較する。そのため、Tpnファミリーの構造を解析した結果、両端の相同な配列の内部は異なっており、最終的には50タイプ程度に分類されると予想された。全塩基配列が決定できれば、内部配列特異的なプローブが作製でき、総当たりで比較することによってどのタイプが目的の突然変異を誘発しているか同定できるようになるだろう。サザン法およびPCR法で現在維持している牡丹系統の遺伝子構造を解析するとおよそ1/3が遺伝子クローニングに用いた、dp-1対立遺伝子と同じ構造をしていたが、他は独立の起源を持つかトランスポゾンの2次突然変異によると思われる。

据信，大多数早晨的荣耀突变体是由转座插入引起的，这些突变体是非常宝贵的遗传资源，但是它们是从国家遗传学研究所转移的，自1990年以来就没有续签。因此，大多数菌株已于今年培养和更新。还保留了所有这些栽培菌株的照片。主要在晨胶中突变的TPN转座子在末端核苷酸序列中都是同源的，并且可以将转座标记用于基因克隆。为了开发这种方法，我们尝试了以下内容：1）使用TPN末端序列的引物进行突变菌株和野生型的减法方法。该方法在背景中不是统一的，并且耗时耗时，以确定哪些TPN插入与突变性状相对应。另一种尝试是使用RDA方法比较，其中使用体细胞突变体的DNA样品扩增了分化的DNA片段。 2）使用TPN家族中的探针使用高分辨率的Southern印迹方法比较突变体和野生型的基因组结构。因此，在分析了TPN家族的结构后，可以预测两端的同源序列是不同的，并且最终将分为大约50种类型。一旦确定了整个碱基序列，就可以产生内部序列特异性探针，而蛮力比较将使我们能够识别哪种类型诱导了感兴趣的突变。当分析目前由南部和PCR方法维持的牡丹菌株的遗传结构时，大约1/3基因的结构与用于基因克隆的DP-1等位基因相同，但其他基因具有独立的起源，或者可能是由于transposon的继发性突变所致。