Inaktivierung des humanen RBP-J Gens in somatischen B-Zellinien durch Insertionsmutagenese über homologe Rekombination, dem "Gene Targeting"

通过同源重组“基因靶向”插入突变使体细胞 B 细胞系中的人 RBP-J 基因失活

• 批准号: 5287534
• 负责人: Dr. Bettina Kempkes
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Klinische Molekularbiologie und Tumorgenetik (KMOLBI) (aufgelöst)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2002-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5287534?language=en
• 关键词: Inaktivierung; des; humanen; RBP; Gens

Das Epstein-Barr Virus infiziert und immortalisiert primäre B-Zellen. In der EBV immortalisierten B-Zelle werden 6 virale Kernproteine (EBNA-LP, EBNA1, EBNA2, 3A, 3B und 3C) und 3 Membranproteine (LMP1, 2A und 2B) exprimiert, die im Verlauf dieses Immortalisierungsprozesses kooperieren und zahlreiche zelluläre Signalwege der B-Zelle aktivieren. Ein zellulärer Signalweg, der RBP-J Signalweg, wird simultan von den verschiedenen viralen Kernantigenen moduliert. RBP-J ist ein bifunktioneller Effektor: ein ubiquitär exprimierter Repressor der Transkription und auch ein Anker für Transaktivatoren. Die Regulation der RBP-J Signaltransduktion in der EBV immortalisierten B-Zelle ist sehr komplex. So antagonisiert die EBNA-3/RBP-J Interaktion die EBNA2/RBP-J vermittelte Transaktivierung. Ziel des Forschungsvorhabens ist die funktionelle Analyse dieser Interaktionen in der B-Zelle. Diese Analyse wird durch die ubiquitäre Expression des RBP-J Proteins erschwert. Um RBP-J abhängige und unabhängige Prozesse voneinander unterscheiden zu können, wollen wir RBP-J homozygot negative humane B-Zellen herstellen. Der Vergleich des Phänotyps dieser B-Zellen mit RBP-J positiven B-Zellen, vor und nach EBV Infektion, soll uns eine funktionelle Analyse des RBP-J Signalweges ermöglichen.

Epstein-Barr Virus infiziert und immortalisiert primäre B-Zellen.在EB病毒不死性B-Zelle韦尔登中，表达6种病毒核蛋白（EBNA-LP、EBNA 1、EBNA 2、3A、3B和3C）和3种膜蛋白（LMP 1、2A和2B），通过这种不死性方法进行操作，并在B-Zelle激活信号线上进行标记。在RBP-J Signalweg中，一个更小的Signalweg将同时被验证为Kernantigenen moduliert。RBP-J是一种双功能效应器：一种普遍存在的转录抑制因子，也是一种转录抑制因子。在EBV不死性B-Zelle中RBP-J信号转导的调节是非常复杂的。因此，EBNA-3/RBP-J的相互作用将使EBNA-2/RBP-J的跨导性降低。研究领域是分析B-Zelle中交互作用的功能。通过对RBP-J蛋白的普遍表达进行分析。在RBP-J抗体检测和非检测过程中，我们将检测到RBP-J纯合阴性的人源性B-泽伦。B-Zellen与RBP-J阳性B-Zellen的表型差异，在EBV感染后，可通过对RBP-J信号通路的功能分析来确定。