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生体金属による小分子の活性化

生物金属活化小分子

基本信息

批准号：
08249102
负责人：
森島績
金额：
$ 105.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度に引き続き、森島らは、いくつかのアミノ酸置換西洋わさびペルオキシターゼ(HRP)を作製し、ペルオキシターゼ反応における近位側芳香族アミノ酸残基の役割について検討を行った。本年度は、近位側にチロシン残基を導入したHRPの2種の変異体F179Y(Phe179-〉Tyr)、F221Y(Phe221->Tyr)を作製し、プロスタグランジン合成酵素(PGHS)でみられるような反応中間体としてのチロシンラジカルが生成するかどうか検討した。その結果、Phe179位にチロシン残基を導入した変異HRPはそのESRスペクトルから、PGHSでみられるようなチロシンラジカルを生成していることが明らかになった。一方、Trpの導入でトリプトファンラジカルが生成したPhe221位では、一般に酸化され易いとされているチロシン残基を導入してもポルフィリンラジカルしか生成せず、このことは、蛋白質中のアミノ酸残基がラジカルになるかどうかは、アミノ酸固有の性質やポルフィリンからの距離だけではなく、そのアミノ酸の置かれた環境が大きく影響するものと考えられた。渡辺は、ヘム近傍のアミノ酸を置換したミオグロビンを種々のヘム酵素のモデルとして、用い、ミオグロビンにおいてもヘム周辺に適切なアミノ酸置換を行うことで、ペルオキシターゼやチトクロムP450と同様な反応中間体や触媒活性が実現できることを明らかにした。長谷は、いくつかのアミノ酸置換亜硫酸還元酵素を作製し、その基質認識機構や還元機構を検討した。城は一酸化窒素還元酵素の高分解能のX線構造解析と、そのイソシアニド複合体の可視吸収・赤外分光測定を用いて、一酸化窒素還元の分子機構を検討した。郷はペルオキシターゼなど多くの金属結合蛋白質のモジュール構造を明らかにすることにより、金属結合部位を形成する普遍的なモジュールを推定した。

Last year, we conducted a study on the treatment of proximal aromatic acid residues in the presence of HRP. This year, two HRP variants, F179Y (Phe179-> Tyr) and F221Y (Phe221-> Tyr), were introduced into the proximal side of the protein residues, and the synthesis of the enzyme PGHS was investigated. The results showed that the Phe179 residue was introduced into the ESR and PGHS. The introduction of Trp residues into the Phe 221 position is generally accompanied by the introduction of acid residues into the protein. The environment is very important to the environment. The enzyme activity of the enzyme is determined by the substitution of the acid in the vicinity of the enzyme. Hasetani, X-ray structural analysis of high decomposition energy of an acid-reducing enzyme, visible absorption and infrared spectroscopy of a complex of acid-reducing enzymes, and molecular mechanism of an acid-reducing enzyme were studied. The structure of metal-binding proteins is expected to be common in the formation of metal-binding sites.